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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我看看为什么这个WESTERN BLOT的结果
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herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] 大家帮我看看为什么这个WESTERN BLOT的结果

最近扫出来的膜都是类似这样的结果~然后考染时感觉胶上的条带也挺花的。之前用这批样品做过内参，跑出来是正常的。但是做这个大分子的蛋白却总有问题。PS：条件之前用其他的样品摸过，跑出来是正常的。想请问一下大家，看这个图感觉是什么地方出了问题啊？（抗体什么的都是新配的问题不大。有点怀疑是在转膜的一步，但又不太确定到底是什么问题。因为以前都是用同样的方法，是做出比较漂亮的条带的。）
大家帮我看看为什么这个WESTERN BLOT的结果
001.JPG


大家帮我看看为什么这个WESTERN BLOT的结果-1
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1楼 2013-08-10 18:31:45
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华农夏田

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是转膜时间不够吧？
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要科研也要生活
2楼2013-08-10 20:16:43
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 华农夏田 at 2013-08-10 20:16:43
是转膜时间不够吧？

感觉是有条带的啊。而且之前做过这个大分子蛋白的，时间什么的条件都摸过一遍也是做得出漂亮的条带的。但是不知道这个为什么有些条带就好花啊。而且胶上也是。
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3楼2013-08-10 20:53:06
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mzx89

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我感觉应该是转膜时间不对头
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4楼2013-08-10 21:00:54
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mzx89 at 2013-08-10 21:00:54
我感觉应该是转膜时间不对头

那从图上看时转膜时间太长还是太短了呢？感觉同一块膜右边要比左边好一点儿的感觉啊。。。您以前做WB转膜时间有问题时也出现过这种情况吗？可以解释的详细一点儿吗？因为我都是按之前的转膜条件做的。时间什么的也是转膜仪都设定好的呀。。。还是说不同的样品要重新摸条件？
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5楼2013-08-10 23:23:04
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华农夏田

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by herjasmine at 2013-08-10 20:53:06
感觉是有条带的啊。而且之前做过这个大分子蛋白的，时间什么的条件都摸过一遍也是做得出漂亮的条带的。但是不知道这个为什么有些条带就好花啊。而且胶上也是。...

那SDS跑的不好
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要科研也要生活
6楼2013-08-11 11:55:49
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mzx89

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该根据不同的样品设计转膜时间，换一换试试啊
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7楼2013-08-14 13:39:32
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开开心心520

木虫 (小有名气)
我最近做 也有出现过这样的问题 不知道为什么 估计是胶或者跑胶的问题
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8楼2013-09-04 21:56:24
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忽而今秋

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

目测像是胶凝的不均匀或者转膜时间不够

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2013-09-05 00:24:55
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