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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何纯化PCR产物？为什么总是不纯呢？
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何纯化PCR产物？为什么总是不纯呢？

RT ，PCR产物胶回收，用的是zymoclean GEL recover kit但是总是不纯，260/230比值总是低于1。后续的PCR 已经做不出来了。

大家是怎么纯化的呢？
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1楼 2013-08-01 18:57:11
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最简单的方法是直接交由公司纯化和测序，比如生工什么的在这方面都做得很好
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兴趣是第一导师，我爱它，因此我毫无疲倦的探索
3楼2013-08-01 20:36:01
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liyongliangx(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-01 22:33:25
纯化后，跑胶了没有，看看浓度和片段大小，再酶切判断是否正确PCR
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越学越无知
2楼2013-08-01 19:07:25
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hao327791557

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是胶回收试剂盒的问题吧，我纯化后的DNA的260/230的值也好低，我用的是天根的胶回收试剂盒。用Axygen的回收后，效果很好，浓度也很好。，
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不懈
4楼2013-08-01 23:02:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
A260/230低主要是有机试剂污染，比方说乙醇没去干净。不过A260/230低不应该影响PCR的，因为PCR所需模板量很少，一般需要稀释很多倍，少量污染对后续反应体系的影响应该比较小了。
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5楼2013-08-02 00:26:31
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