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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何纯化PCR产物?为什么总是不纯呢?

RT ,PCR产物胶回收,用的是zymoclean GEL recover kit但是总是不纯,260/230比值总是低于1。后续的PCR 已经做不出来了。

大家是怎么纯化的呢?
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liyongliangx(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-01 22:33:25
纯化后,跑胶了没有,看看浓度和片段大小,再酶切判断是否正确PCR
越学越无知
2楼2013-08-01 19:07:25
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最简单的方法是直接交由公司纯化和测序,比如生工什么的在这方面都做得很好
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
3楼2013-08-01 20:36:01
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hao327791557

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是胶回收试剂盒的问题吧,我纯化后的DNA的260/230的值也好低,我用的是天根的胶回收试剂盒。用Axygen的回收后,效果很好,浓度也很好。,
不懈
4楼2013-08-01 23:02:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
A260/230低主要是有机试剂污染,比方说乙醇没去干净。不过A260/230低不应该影响PCR的,因为PCR所需模板量很少,一般需要稀释很多倍,少量污染对后续反应体系的影响应该比较小了。
5楼2013-08-02 00:26:31
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