应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量和半定量的问题？？急！！在线等回复
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1918  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

学术问题

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量和半定量的问题？？急！！在线等回复

我基因做半定量 条带不是太好。  我的半定量做了好几次了，效果就是不好，不知道是什么原因啊 ，可能是引物的问题。  我想请问可不可以直接做荧光相对定量实验啊，我想这样的话  我的引物有没有二聚体，有没有非特异性扩增就一目了然了啊。引物不行就直接换引物了，  我说的对不对啊？？？ 在线等答案…………………………
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
微生物小硕
1楼 2013-07-28 09:08:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小乖_1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做荧光的话是不能有非特异性扩增的，引物二聚体也尽量没有。
赞一下 回复此楼
走自己的路，让别人羡慕嫉妒恨去吧！！！
7楼2013-07-29 09:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-28 16:04:40
我不知道你说的半定量条带不好是指有引物二聚体，或者是有其它非特异条带？如果你做半定量PCR时能看到引物二聚体，直接说明引物不好，根本不用试荧光定量。因为荧光定量非常灵敏，如果胶上能看到的话荧光肯定能检测到引物的熔解峰。如果有非特异条带，经优化退火温度仍然不能去掉，也说明引物不好，直接换引物。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-28 11:18:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-28 11:18:26
我不知道你说的半定量条带不好是指有引物二聚体，或者是有其它非特异条带？如果你做半定量PCR时能看到引物二聚体，直接说明引物不好，根本不用试荧光定量。因为荧光定量非常灵敏，如果胶上能看到的话荧光肯定能检测 ...

引物二聚体 倒不是很明显   有非特异性扩增，  目的条带非常的弱  只有内参特别亮！我觉得直接上荧光，引物行不行或者是其他什么问题，就可以直接知道了， 就不明白为什么还多此一举做个半定量，实在搞不懂？
赞一下 回复此楼
微生物小硕
3楼2013-07-28 17:08:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 学术问题 at 2013-07-28 17:08:11
引物二聚体 倒不是很明显   有非特异性扩增，  目的条带非常的弱  只有内参特别亮！我觉得直接上荧光，引物行不行或者是其他什么问题，就可以直接知道了， 就不明白为什么还多此一举做个半定量，实在搞不懂？...

半定量比较省钱，而且对PCR仪器没太多要求。如果有条件可以直接用荧光，先做个引物退火温度梯度，看熔解曲线的效果。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-28 23:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +9 辰沐5211314 2026-03-26 9/450 2026-03-29 01:12 by 我是小康
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +10 Mr. Z 2026-03-25 10/500 2026-03-29 00:34 by 我是小康
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 考研调剂 +10 呼呼？~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
[考研] 材料学硕，求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 一志愿北化求调剂 +3 Jsman 2026-03-22 3/150 2026-03-26 21:06 by ajpv风雷
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭