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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE凝胶电泳跑出来的条带问题

做的是娃哈哈乳饮料的蛋白质测定，直接从买来的乳饮料中取样跑电泳。用的是15%的分离胶和5%的浓缩胶，但是跑出来的marker只有三条带，而且颜色非常淡，样品跑出来条带拖尾，非常不理想，请问是什么原因呢？？？求指导那，跑了三四次都这样，试剂溶液都是新配的，marker也是新买的。
SDS-PAGE凝胶电泳跑出来的条带问题
201307243056.jpg
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1楼 2013-07-27 17:24:34
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 22:17:50
蛋白浓度测定都是基于比色，如bradford法，lowrey法等，你可查查常见的方法书。
也有试剂盒卖。
还有一种用G-250配置标准曲线的方法，可以实验室自行配置，试剂简单。很常见，网上或方法书上总会有。
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7楼2013-07-27 22:09:36
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 22:17:16
樱花稀砂: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-28 19:11:17
你的染色看起来怪怪的，是G-250吗
别直接用饮料原液，跑蛋白样品需要纯化。可以选多种方法，如TCA沉淀，稀释后超滤离心等。电泳之前测一下浓度再上样。
关于marker，你可以跑一个空胶，只上marker看看。如果电泳本身ok，没有样品的情况下，marker可能会宽一些，但其他都应该正常。
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2楼2013-07-27 21:05:59
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 22:17:26
ladder很淡，应该是load量不够，至于样品拖尾的话，一般可以降低电压，信新配running buffer来避免！
Good luck
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互助互励，共奋共进！！
3楼2013-07-27 21:21:53
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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-27 21:21:53
ladder很淡，应该是load量不够，至于样品拖尾的话，一般可以降低电压，信新配running buffer来避免！
Good luck

ok,谢谢哦
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4楼2013-07-27 21:48:43
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