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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE凝胶电泳跑出来的条带问题

做的是娃哈哈乳饮料的蛋白质测定,直接从买来的乳饮料中取样跑电泳。用的是15%的分离胶和5%的浓缩胶,但是跑出来的marker只有三条带,而且颜色非常淡,样品跑出来条带拖尾,非常不理想,请问是什么原因呢???求指导那,跑了三四次都这样,试剂溶液都是新配的,marker也是新买的。
SDS-PAGE凝胶电泳跑出来的条带问题
201307243056.jpg
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 22:17:26
ladder很淡,应该是load量不够,至于样品拖尾的话,一般可以降低电压,信新配running buffer来避免!
Good luck
互助互励,共奋共进!!
3楼2013-07-27 21:21:53
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 22:17:16
樱花稀砂: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-28 19:11:17
你的染色看起来怪怪的,是G-250吗
别直接用饮料原液,跑蛋白样品需要纯化。可以选多种方法,如TCA沉淀,稀释后超滤离心等。电泳之前测一下浓度再上样。
关于marker,你可以跑一个空胶,只上marker看看。如果电泳本身ok,没有样品的情况下,marker可能会宽一些,但其他都应该正常。
2楼2013-07-27 21:05:59
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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-27 21:21:53
ladder很淡,应该是load量不够,至于样品拖尾的话,一般可以降低电压,信新配running buffer来避免!
Good luck

ok,谢谢哦
4楼2013-07-27 21:48:43
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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by spaceman_jia at 2013-07-27 21:05:59
你的染色看起来怪怪的,是G-250吗
别直接用饮料原液,跑蛋白样品需要纯化。可以选多种方法,如TCA沉淀,稀释后超滤离心等。电泳之前测一下浓度再上样。
关于marker,你可以跑一个空胶,只上marker看看。如果电泳本 ...

染色用的是G-250的,染色液重新配会不会好点呢?电泳之前测浓度,这是怎么测的呢?配胶时AP和TEMED多加几倍,会有影响吗?
5楼2013-07-27 21:54:47
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