应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重叠延伸PCR
71/1返回列表
查看: 747  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 重叠延伸PCR

各位大侠：
我要做三个片段进行重叠延伸PCR将他们连接起来成一个长片段，引物该如何设计？长度应该是多少？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
1楼 2013-07-25 16:00:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
761429495(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩，gy版热心肠 2013-07-25 23:26:08
三个片段，假设是A，B，C，设计引物是AB有一段overlap，BC有一段overlap，overlap我做过最短18bp的，一般25bp，基因特异引物就是普通的设计方法，跑PCR时，AB fusion，BCfusion，然后跑胶回收，将AB 和BC一起跑，这个描述起来，对我来说很复杂，谅解哈
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-07-25 16:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这方面文献横多的，楼主可以找些看看，2楼说的经典。就是这个意思。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-26 10:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其实也没必要两两混合，我最近做过几个都是十几条长引物混到一起扩的，都做出来了，为了省钱，全基因合成还是太贵了
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-26 15:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2楼说的很好，可以去网上看看overlap-pcr引物设计时的要求及特点就好了，都能很顺利的连接上
赞一下 回复此楼
坚持不懈,终会成功!
5楼2013-07-26 16:55:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by huoyongting at 2013-07-26 15:19:44
其实也没必要两两混合，我最近做过几个都是十几条长引物混到一起扩的，都做出来了，为了省钱，全基因合成还是太贵了

这个还是要取决她融合基因的长度，如果要融合几K的话，合成引物回来混一起扩增，还是蛮费钱的，都差不多吧，除了基因合成，都得做PCR，就看哪个可靠和稳定
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-07-26 17:19:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huoyongting

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-26 17:19:23
这个还是要取决她融合基因的长度，如果要融合几K的话，合成引物回来混一起扩增，还是蛮费钱的，都差不多吧，除了基因合成，都得做PCR，就看哪个可靠和稳定...

他已经有3个片段作为模板了，当然就不用合那么多条引物了，6条就够了，呵呵
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-26 17:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 761429495 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +4 yexuqing 2026-04-19 4/200 2026-04-20 14:47 by brantleo
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 5/250 2026-04-20 10:47 by YuY66
[考研] 通信工程求调剂！！！ +7 zlb770521 2026-04-14 7/350 2026-04-19 20:56 by Equinoxhua
[考研] 297，工科调剂? +11 河南农业大学-能 2026-04-14 11/550 2026-04-19 20:07 by Equinoxhua
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭