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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重叠延伸PCR
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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 重叠延伸PCR

各位大侠：
我要做三个片段进行重叠延伸PCR将他们连接起来成一个长片段，引物该如何设计？长度应该是多少？
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
1楼 2013-07-25 16:00:40
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
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761429495(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩，gy版热心肠 2013-07-25 23:26:08
三个片段，假设是A，B，C，设计引物是AB有一段overlap，BC有一段overlap，overlap我做过最短18bp的，一般25bp，基因特异引物就是普通的设计方法，跑PCR时，AB fusion，BCfusion，然后跑胶回收，将AB 和BC一起跑，这个描述起来，对我来说很复杂，谅解哈
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2楼2013-07-25 16:09:18
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史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这方面文献横多的，楼主可以找些看看，2楼说的经典。就是这个意思。
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3楼2013-07-26 10:13:50
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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其实也没必要两两混合，我最近做过几个都是十几条长引物混到一起扩的，都做出来了，为了省钱，全基因合成还是太贵了
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4楼2013-07-26 15:19:44
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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2楼说的很好，可以去网上看看overlap-pcr引物设计时的要求及特点就好了，都能很顺利的连接上
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坚持不懈,终会成功!
5楼2013-07-26 16:55:01
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by huoyongting at 2013-07-26 15:19:44
其实也没必要两两混合，我最近做过几个都是十几条长引物混到一起扩的，都做出来了，为了省钱，全基因合成还是太贵了

这个还是要取决她融合基因的长度，如果要融合几K的话，合成引物回来混一起扩增，还是蛮费钱的，都差不多吧，除了基因合成，都得做PCR，就看哪个可靠和稳定
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6楼2013-07-26 17:19:23
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huoyongting

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-26 17:19:23
这个还是要取决她融合基因的长度，如果要融合几K的话，合成引物回来混一起扩增，还是蛮费钱的，都差不多吧，除了基因合成，都得做PCR，就看哪个可靠和稳定...

他已经有3个片段作为模板了，当然就不用合那么多条引物了，6条就够了，呵呵
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7楼2013-07-26 17:30:09
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