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longyh6411

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC酶活测定

HPLC酶活测定底物是否也是要色谱纯的呢?底物和生成物都需要测定吗?还有底物和底物的标准品使用一样的药品呢还是需要分别买?

[ Last edited by longyh6411 on 2013-7-23 at 20:42 ]
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lwiaanngg

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longyh6411: 金币+50, 有帮助 2013-09-18 16:17:30
问的有些笼统了,不太知道你到底想了解什么
尝试着回答一下了:
1. 你做这个实验的目的是什么?想知道转化率还是酶活?这是两个完全同的方法:酶活的话,你需要in situ的做法,这个要求你要能够控制好反应体系的反应速率,否则你计算出的Km和Vmax误差较大。如果你测量转化率,只需要注意测量精度和反应时间了。
2. 如果是活性测量,只需要关注一个。如果你是侧转化率,需要两个都做,然后用守恒来验证你测量的正确与否。
3. 至于底物,取决于你用什么了,这个没有定论。
2楼2013-07-23 21:16:07
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