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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)

[求助] 求助——看看我的PCR

水体18srDNA，退火温度55， 为啥杂带这么多？
求助——看看我的PCR
130722aa.jpg


求助——看看我的PCR-1
130723a.jpg

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-24 at 09:25 ]
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1楼 2013-07-23 17:27:05
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谢开龙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:21:17
做一个梯度，看一下条带数量有没变化。
就知道是不是引物特异性不好了
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2楼2013-07-24 00:15:07
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:21:24
同意楼上的，做个梯度看看吧，要不就再稍微增加下退火温度
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3楼2013-07-24 08:50:24
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qming82

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2013-07-24 09:41:13
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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:21:35
做touch-down、加DMSO、提高退火温度等，你得试试才知道什么问题
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5楼2013-07-24 10:18:40
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weiquanzeng

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你模板的纯度测了没有，应该是纯度的问题。
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6楼2013-07-25 19:32:24
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15994135778

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板量多了，引物浓度再降一半试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2013-07-25 23:07:22
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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 谢开龙 at 2013-07-24 00:15:07
做一个梯度，看一下条带数量有没变化。
就知道是不是引物特异性不好了

第一张图的前7个条带就是一个梯度，
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8楼2013-07-26 15:02:16
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勇敢小飞侠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lloveyr at 2013-07-24 10:18:40
做touch-down、加DMSO、提高退火温度等，你得试试才知道什么问题

这个就是touch down，这几天提到56度，效果好一些，但还是有杂带
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9楼2013-07-26 15:03:18
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

下面那个图 第一个条带 温度提高3-5度 杂带应该就没了
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10楼2013-07-26 17:32:33
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