应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR 产量低！江湖告急！老板，大侠救命啊！
151/2返回列表12下一页
查看: 2307  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

biomeng

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR 产量低！江湖告急！老板，大侠救命啊！

江湖告急！老板，大侠救命啊！RNA提出来了，用BIOrad 的反转录盒子做的反转录。根据说明书用2ul cDNA做模板进行PCR. 5个基因有四个p出来了，大小都对。但是现在问题来了，5个中4个产量超低，加10ul跑胶才能看见比较弱的一条带。调整退火温度，Mg 浓度都试了可是还是产量上不去。空白对照也做了，不可能是污染。最搞的是Taq搞得出来，pfu搞不出来。老板能不能帮帮解决一下啊！谢谢！只要pcr产物浓度上去就成
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-08 19:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-11-08 22:01:20
biomeng(金币+5): 谢谢帮助 2011-11-09 14:44:00
引用回帖:
1楼: Originally posted by biomeng at 2011-11-08 19:33:06:
江湖告急！老板，大侠救命啊！RNA提出来了，用BIOrad 的反转录盒子做的反转录。根据说明书用2ul cDNA做模板进行PCR. 5个基因有四个p出来了，大小都对。但是现在问题来了，5个中4个产量超低，加10ul跑胶才能看 ...

你增大循环数和起始模板量不就行了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-11-08 20:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-08 22:01:14
将pcr产物作为模板再跑次PCR。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-11-08 21:23:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 专家言简意赅啊！ 2011-11-08 22:01:07
biomeng(金币+5): 1，3都试了。没什么明显效果。2在进行中。谢谢 2011-11-09 14:45:13
有3种方法：
1.加大模板量及增加循环次数
2.以扩出来的产物为模板继续扩增
3.先进行20个循环的预扩增，然后以此为模板，再次补充酶和dNTP进行扩增
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-11-08 21:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomeng

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-11-08 20:50:47:
你增大循环数和起始模板量不就行了

哥哥要是成的话我还用发帖求助吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-09 14:42:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
我也有如此问题。。。
回复此楼
6楼2011-11-09 15:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丙氨酸密码子 at 2011-11-08 21:23:22:
将pcr产物作为模板再跑次PCR。

我用PCR产物作为模板再跑了次，可是还是没有什么明显的改善。。。额。。
赞一下 回复此楼
7楼2011-11-09 15:04:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-11-08 20:50:47:
你增大循环数和起始模板量不就行了

35的循环还少么？模板量一直是用的1微升
赞一下 回复此楼
8楼2011-11-09 15:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励积极交流！ 2011-11-09 21:34:08
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-11-08 21:55:37:
有3种方法：
1.加大模板量及增加循环次数
2.以扩出来的产物为模板继续扩增
3.先进行20个循环的预扩增，然后以此为模板，再次补充酶和dNTP进行扩增

如你所说，进行20个循环的预扩增，然后以此为模板，补充酶和dNTP，是不是相当于第二种方法，即把PCR产物作为模板继续扩增？还是仅仅需要补充酶和dNTP在原先的管子里，继续下面的15个循环（我一般是跑35个循环）。如果补充酶和dNT的话，量要和第一次一样多么？谢谢
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-11-09 15:10:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以用巢式PCR做一下
赞一下 回复此楼
飞的更高
10楼2011-11-09 16:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biomeng 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭