应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR 产量低！江湖告急！老板，大侠救命啊！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
151/2返回列表12下一页
查看: 1921  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

biomeng

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR 产量低！江湖告急！老板，大侠救命啊！

江湖告急！老板，大侠救命啊！RNA提出来了，用BIOrad 的反转录盒子做的反转录。根据说明书用2ul cDNA做模板进行PCR. 5个基因有四个p出来了，大小都对。但是现在问题来了，5个中4个产量超低，加10ul跑胶才能看见比较弱的一条带。调整退火温度，Mg 浓度都试了可是还是产量上不去。空白对照也做了，不可能是污染。最搞的是Taq搞得出来，pfu搞不出来。老板能不能帮帮解决一下啊！谢谢！只要pcr产物浓度上去就成
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-08 19:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-11-08 22:01:20
biomeng(金币+5): 谢谢帮助 2011-11-09 14:44:00
引用回帖:
1楼: Originally posted by biomeng at 2011-11-08 19:33:06:
江湖告急！老板，大侠救命啊！RNA提出来了，用BIOrad 的反转录盒子做的反转录。根据说明书用2ul cDNA做模板进行PCR. 5个基因有四个p出来了，大小都对。但是现在问题来了，5个中4个产量超低，加10ul跑胶才能看 ...

你增大循环数和起始模板量不就行了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-11-08 20:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-08 22:01:14
将pcr产物作为模板再跑次PCR。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-11-08 21:23:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 专家言简意赅啊！ 2011-11-08 22:01:07
biomeng(金币+5): 1，3都试了。没什么明显效果。2在进行中。谢谢 2011-11-09 14:45:13
有3种方法：
1.加大模板量及增加循环次数
2.以扩出来的产物为模板继续扩增
3.先进行20个循环的预扩增，然后以此为模板，再次补充酶和dNTP进行扩增
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-11-08 21:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomeng

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-11-08 20:50:47:
你增大循环数和起始模板量不就行了

哥哥要是成的话我还用发帖求助吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-09 14:42:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
我也有如此问题。。。
回复此楼
6楼2011-11-09 15:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丙氨酸密码子 at 2011-11-08 21:23:22:
将pcr产物作为模板再跑次PCR。

我用PCR产物作为模板再跑了次，可是还是没有什么明显的改善。。。额。。
赞一下 回复此楼
7楼2011-11-09 15:04:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-11-08 20:50:47:
你增大循环数和起始模板量不就行了

35的循环还少么？模板量一直是用的1微升
赞一下 回复此楼
8楼2011-11-09 15:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励积极交流！ 2011-11-09 21:34:08
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-11-08 21:55:37:
有3种方法：
1.加大模板量及增加循环次数
2.以扩出来的产物为模板继续扩增
3.先进行20个循环的预扩增，然后以此为模板，再次补充酶和dNTP进行扩增

如你所说，进行20个循环的预扩增，然后以此为模板，补充酶和dNTP，是不是相当于第二种方法，即把PCR产物作为模板继续扩增？还是仅仅需要补充酶和dNTP在原先的管子里，继续下面的15个循环（我一般是跑35个循环）。如果补充酶和dNT的话，量要和第一次一样多么？谢谢
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-11-09 15:10:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以用巢式PCR做一下
赞一下 回复此楼
飞的更高
10楼2011-11-09 16:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biomeng 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +11 梁富贵险中求 2026-04-04 11/550 2026-04-06 10:43 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿青科085500，初试295分，公共课213分 +3 遇到的人愿望都� 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:45 by 蓝云思雨
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 358求调剂 +7 秋gk 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:29 by huangmoli
[考研] 工科277分求调剂材料 +8 上了上了上哦 2026-04-05 9/450 2026-04-05 13:05 by wwytracy
[考研] 296材料专硕求调剂 +21 202451007219 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 21:48 by hemengdong
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 277工科求调剂 +7 1915668 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:21 by 啊俊！
[考研] 0703求调剂 +6 zizimo 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:16 by 无际的草原
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考博] 申博求助 +3 Reee1Llll 2026-04-01 3/150 2026-04-02 22:29 by 这是一个无聊的�
[考研] 一志愿复旦材料，英一专硕，总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 0805求调剂 +8 是水分 2026-03-31 8/400 2026-04-02 10:46 by guanxin1001
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 土木304求调剂 +6 兔突突突， 2026-03-31 7/350 2026-04-02 09:06 by coolminer
[考研] 考研调剂 +12 Amber00 2026-03-31 12/600 2026-04-02 09:04 by sanrepian
[考研] 环境工程调剂 +9 hyzzzzzzz. 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:20 by salamander`
[考研] 【调剂】一志愿厦大生物与医药调剂 +3 Echo虾米 2026-03-31 3/150 2026-04-01 08:40 by JourneyLucky
[考研] 生物考研337分求调剂 +4 cgxin 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:18 by 记事本2026
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭