24小时热门版块排行榜    

查看: 2257  |  回复: 14
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

biomeng

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR 产量低!江湖告急!老板,大侠救命啊!

江湖告急!老板,大侠救命啊!RNA提出来了,用BIOrad 的反转录盒子做的反转录。根据说明书用2ul cDNA做模板进行PCR. 5个基因有四个p出来了,大小都对。但是现在问题来了,5个中4个产量超低,加10ul跑胶才能看见比较弱的一条带。调整退火温度,Mg 浓度都试了可是还是产量上不去。空白对照也做了,不可能是污染。最搞的是Taq搞得出来,pfu搞不出来。老板能不能帮帮解决一下啊!谢谢!只要pcr产物浓度上去就成
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good 2011-11-08 22:01:20
biomeng(金币+5): 谢谢帮助 2011-11-09 14:44:00
引用回帖:
1楼: Originally posted by biomeng at 2011-11-08 19:33:06:
江湖告急!老板,大侠救命啊!RNA提出来了,用BIOrad 的反转录盒子做的反转录。根据说明书用2ul cDNA做模板进行PCR. 5个基因有四个p出来了,大小都对。但是现在问题来了,5个中4个产量超低,加10ul跑胶才能看 ...

你增大循环数和起始模板量不就行了
2楼2011-11-08 20:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-08 22:01:14
将pcr产物作为模板再跑次PCR。
3楼2011-11-08 21:23:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 专家言简意赅啊! 2011-11-08 22:01:07
biomeng(金币+5): 1,3都试了。没什么明显效果。2在进行中。谢谢 2011-11-09 14:45:13
有3种方法:
1.加大模板量及增加循环次数
2.以扩出来的产物为模板继续扩增
3.先进行20个循环的预扩增,然后以此为模板,再次补充酶和dNTP进行扩增
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-11-08 21:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomeng

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-11-08 20:50:47:
你增大循环数和起始模板量不就行了

哥哥要是成的话我还用发帖求助吗?
5楼2011-11-09 14:42:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)

我也有如此问题。。。
6楼2011-11-09 15:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 丙氨酸密码子 at 2011-11-08 21:23:22:
将pcr产物作为模板再跑次PCR。

我用PCR产物作为模板再跑了次,可是还是没有什么明显的改善。。。额。。
7楼2011-11-09 15:04:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-11-08 20:50:47:
你增大循环数和起始模板量不就行了

35的循环还少么?模板量一直是用的1微升
8楼2011-11-09 15:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dls1987

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励积极交流! 2011-11-09 21:34:08
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-11-08 21:55:37:
有3种方法:
1.加大模板量及增加循环次数
2.以扩出来的产物为模板继续扩增
3.先进行20个循环的预扩增,然后以此为模板,再次补充酶和dNTP进行扩增

如你所说,进行20个循环的预扩增,然后以此为模板,补充酶和dNTP,是不是相当于第二种方法,即把PCR产物作为模板继续扩增?还是仅仅需要补充酶和dNTP在原先的管子里,继续下面的15个循环(我一般是跑35个循环)。如果补充酶和dNT的话,量要和第一次一样多么?谢谢
9楼2011-11-09 15:10:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以用巢式PCR做一下
飞的更高
10楼2011-11-09 16:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biomeng 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +9 等待解的谜 2026-08-06 13/650 2026-08-06 20:42 by Vivilian
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 听说今天filecode变了 +13 布布和一二 2026-08-06 26/1300 2026-08-06 20:26 by 超级海虾
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:19 by 苏知砚
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +3 archvillain 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:11 by olivermiaoer
[基金申请] 基金中了 +4 laoda193707 2026-08-06 4/200 2026-08-06 18:56 by olivermiaoer
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备? 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见