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勇敢小飞侠

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水体18srDNA，退火温度55，为啥杂带这么多？

求助——看看我的PCR

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[ Last edited by 1949stone on 2013-7-24 at 09:25 ]

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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:21:17

做一个梯度，看一下条带数量有没变化。
就知道是不是引物特异性不好了

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2楼2013-07-24 00:15:07

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同意楼上的，做个梯度看看吧，要不就再稍微增加下退火温度

3楼2013-07-24 08:50:24

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qming82

禁虫 (初入文坛)

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4楼2013-07-24 09:41:13

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lloveyr

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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:21:35

做touch-down、加DMSO、提高退火温度等，你得试试才知道什么问题

5楼2013-07-24 10:18:40

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weiquanzeng

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不知道你模板的纯度测了没有，应该是纯度的问题。

6楼2013-07-25 19:32:24

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模板量多了，引物浓度再降一半试试。

[ 发自小木虫客户端 ]

7楼2013-07-25 23:07:22

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 谢开龙 at 2013-07-24 00:15:07
做一个梯度，看一下条带数量有没变化。
就知道是不是引物特异性不好了

第一张图的前7个条带就是一个梯度，

8楼2013-07-26 15:02:16

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引用回帖:

5楼: Originally posted by lloveyr at 2013-07-24 10:18:40
做touch-down、加DMSO、提高退火温度等，你得试试才知道什么问题

这个就是touch down，这几天提到56度，效果好一些，但还是有杂带

9楼2013-07-26 15:03:18

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wangqi1107

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下面那个图第一个条带温度提高3-5度杂带应该就没了

10楼2013-07-26 17:32:33

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