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bietaikeqiu

木虫 (职业作家)

[求助] Western Blot中蛋白条带信号强弱与上样体积不成正比的可能原因?

刚接触Western Blot的菜鸟,麻烦各位大侠指教下Wesern Blot中蛋白条带信号强弱与上样体积不成正比的可能原因会是什么呢?

还有就是弱弱的问下,为什么二抗可以和任意蛋白结合呢?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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感谢参与,应助指数 +1
如果不是操作的问题,说明你选取的样品上样量不在一抗该稀释浓度的线性工作范围。
二抗不是和任意蛋白结合,是通过与一抗的igG结合,从而识别结合有一抗的抗原。
2楼2013-06-20 23:16:14
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bietaikeqiu

木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-20 23:16:14
如果不是操作的问题,说明你选取的样品上样量不在一抗该稀释浓度的线性工作范围。
二抗不是和任意蛋白结合,是通过与一抗的igG结合,从而识别结合有一抗的抗原。

谢谢!
关于二抗,我不明白的是为什么有些二抗连预染marker都能杂出很清楚的条带?原理是什么呢?正常的质量好的二抗也能做到这一点吗?
不怨恨、不躁进、不过度、不强求、不悲观、不刻板、不慌乱、不忘形
3楼2013-06-21 09:51:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-22 18:51:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by bietaikeqiu at 2013-06-21 09:51:42
谢谢!
关于二抗,我不明白的是为什么有些二抗连预染marker都能杂出很清楚的条带?原理是什么呢?正常的质量好的二抗也能做到这一点吗?...

有专门做western的marker,原理与western差不多,就是利用HRP-conjugated二抗来识别的。如果不是专门的marker而在western暴光时出现条带,可能是蛋白marker蛋白的制备和二抗的选择上问题。
4楼2013-06-21 12:29:44
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