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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Western Blot中蛋白条带信号强弱与上样体积不成正比的可能原因？
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bietaikeqiu

木虫 (职业作家)

[求助] Western Blot中蛋白条带信号强弱与上样体积不成正比的可能原因？

刚接触Western Blot的菜鸟，麻烦各位大侠指教下Wesern Blot中蛋白条带信号强弱与上样体积不成正比的可能原因会是什么呢？

还有就是弱弱的问下，为什么二抗可以和任意蛋白结合呢？
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1楼 2013-06-20 16:42:18
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bietaikeqiu

木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-20 23:16:14
如果不是操作的问题，说明你选取的样品上样量不在一抗该稀释浓度的线性工作范围。
二抗不是和任意蛋白结合，是通过与一抗的igG结合，从而识别结合有一抗的抗原。

谢谢！
关于二抗，我不明白的是为什么有些二抗连预染marker都能杂出很清楚的条带？原理是什么呢？正常的质量好的二抗也能做到这一点吗？
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不怨恨、不躁进、不过度、不强求、不悲观、不刻板、不慌乱、不忘形
3楼2013-06-21 09:51:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果不是操作的问题，说明你选取的样品上样量不在一抗该稀释浓度的线性工作范围。
二抗不是和任意蛋白结合，是通过与一抗的igG结合，从而识别结合有一抗的抗原。
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2楼2013-06-20 23:16:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-22 18:51:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by bietaikeqiu at 2013-06-21 09:51:42
谢谢！
关于二抗，我不明白的是为什么有些二抗连预染marker都能杂出很清楚的条带？原理是什么呢？正常的质量好的二抗也能做到这一点吗？...

有专门做western的marker，原理与western差不多，就是利用HRP-conjugated二抗来识别的。如果不是专门的marker而在western暴光时出现条带，可能是蛋白marker蛋白的制备和二抗的选择上问题。
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4楼2013-06-21 12:29:44
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