24小时热门版块排行榜    

查看: 4013  |  回复: 7

aprils1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带??? 已有6人参与

请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带???
请问为什么用同样一对样本5月份做western好好的,这个月会变成这样两行条带???
连着发生了两次,另外一对癌和癌旁的样本也是这样,两行。

下图为5月份的western 结果
请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带???-1

一抗是国外某实验室自己提纯的单克隆抗体,1:5000
或者是目的蛋白过了两个月水解了??
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白降解的可能性很小,不过你可以看看大小,看两条带之和是否与蛋白初始大小一致!我个人觉得你可以检查一下大小,看是否存在二聚体,或者蛋白偶合,又或者存在同工酶的情况!good luck!
互助互励,共奋共进!!
2楼2013-07-29 21:49:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PAGE胶的浓度是一致的吗?我一师妹在不同浓度下也出现了一条变两条的情况,目前也不知道原因,猜测可能是蛋白存在磷酸化、甲基化等修饰。
3楼2013-07-30 08:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木笑子

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有可能存在蛋白降解现象,我的样品放久了,就是出现两条带,而新鲜的样品则是一条带。
4楼2013-07-30 09:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sc5921041

木虫 (著名写手)

跟抗体有关系
nostalgia
5楼2013-07-30 10:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiang701820

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能原因:1,回收抗体的时候与其他抗体混在一起了
          2,抗体可能本身特异性不是特别好,存在杂带,所以可能第一次和第二次裁膜的时候位置不一样,第一次杂带没显出来。
          3,WB各种条件也会影响
6楼2013-08-01 17:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aprils1988

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2013-07-30 08:44:12
PAGE胶的浓度是一致的吗?我一师妹在不同浓度下也出现了一条变两条的情况,目前也不知道原因,猜测可能是蛋白存在磷酸化、甲基化等修饰。

呵呵,我最后问了老板,解释:肝组织里含血比较多,新出现的第二行条带正好在25KD的位置,他解释可能是Ig轻链,不过为什么一抗会结合到Ig轻链上我还没仔细想。。。。所以解决办法就是直接转膜前把胶上25kd的胶切掉。。。
7楼2013-08-08 20:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangbighui

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你确定一下你的抗体浓度和蛋白浓度,上样的蛋白浓度高了就会出现这个情况。另外你在确认一下你的曝光时间,将曝光时间缩短。
成功,就是成为你想成为的人
8楼2013-08-09 09:11:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aprils1988 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见