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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带？？？
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aprils1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带？？？ 已有6人参与

请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带？？？
请问为什么用同样一对样本5月份做western好好的，这个月会变成这样两行条带？？？
连着发生了两次，另外一对癌和癌旁的样本也是这样，两行。

下图为5月份的western 结果
请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带？？？-1

一抗是国外某实验室自己提纯的单克隆抗体，1：5000
或者是目的蛋白过了两个月水解了？？
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1楼 2013-07-29 21:01:52
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★
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蛋白降解的可能性很小，不过你可以看看大小，看两条带之和是否与蛋白初始大小一致！我个人觉得你可以检查一下大小，看是否存在二聚体，或者蛋白偶合，又或者存在同工酶的情况！good luck！
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互助互励，共奋共进！！
2楼2013-07-29 21:49:52
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
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PAGE胶的浓度是一致的吗？我一师妹在不同浓度下也出现了一条变两条的情况，目前也不知道原因，猜测可能是蛋白存在磷酸化、甲基化等修饰。
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3楼2013-07-30 08:44:12
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木笑子

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有可能存在蛋白降解现象，我的样品放久了，就是出现两条带，而新鲜的样品则是一条带。
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4楼2013-07-30 09:55:18
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sc5921041

木虫 (著名写手)
跟抗体有关系
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nostalgia
5楼2013-07-30 10:55:35
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jiang701820

银虫 (小有名气)
★
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可能原因：1，回收抗体的时候与其他抗体混在一起了
          2，抗体可能本身特异性不是特别好，存在杂带，所以可能第一次和第二次裁膜的时候位置不一样，第一次杂带没显出来。
          3，WB各种条件也会影响
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6楼2013-08-01 17:33:30
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aprils1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2013-07-30 08:44:12
PAGE胶的浓度是一致的吗？我一师妹在不同浓度下也出现了一条变两条的情况，目前也不知道原因，猜测可能是蛋白存在磷酸化、甲基化等修饰。

呵呵，我最后问了老板，解释：肝组织里含血比较多，新出现的第二行条带正好在25KD的位置，他解释可能是Ig轻链，不过为什么一抗会结合到Ig轻链上我还没仔细想。。。。所以解决办法就是直接转膜前把胶上25kd的胶切掉。。。
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7楼2013-08-08 20:42:54
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zhangbighui

金虫 (正式写手)
★
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你确定一下你的抗体浓度和蛋白浓度，上样的蛋白浓度高了就会出现这个情况。另外你在确认一下你的曝光时间，将曝光时间缩短。
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成功，就是成为你想成为的人
8楼2013-08-09 09:11:13
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