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aprils1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带??? 已有6人参与

请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带???
请问为什么用同样一对样本5月份做western好好的,这个月会变成这样两行条带???
连着发生了两次,另外一对癌和癌旁的样本也是这样,两行。

下图为5月份的western 结果
请问western的目的蛋白为什么经常出现两行条带???-1

一抗是国外某实验室自己提纯的单克隆抗体,1:5000
或者是目的蛋白过了两个月水解了??
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PAGE胶的浓度是一致的吗?我一师妹在不同浓度下也出现了一条变两条的情况,目前也不知道原因,猜测可能是蛋白存在磷酸化、甲基化等修饰。
3楼2013-07-30 08:44:12
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Sthunder

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白降解的可能性很小,不过你可以看看大小,看两条带之和是否与蛋白初始大小一致!我个人觉得你可以检查一下大小,看是否存在二聚体,或者蛋白偶合,又或者存在同工酶的情况!good luck!
互助互励,共奋共进!!
2楼2013-07-29 21:49:52
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木笑子

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有可能存在蛋白降解现象,我的样品放久了,就是出现两条带,而新鲜的样品则是一条带。
4楼2013-07-30 09:55:18
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jiang701820

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能原因:1,回收抗体的时候与其他抗体混在一起了
          2,抗体可能本身特异性不是特别好,存在杂带,所以可能第一次和第二次裁膜的时候位置不一样,第一次杂带没显出来。
          3,WB各种条件也会影响
6楼2013-08-01 17:33:30
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