24小时热门版块排行榜    

查看: 3896  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆基因,用PMD19-T载体转天根的感受态细胞,菌落少,测的序列全是空载体,求原因· 已有1人参与

克隆基因,用PMD19-T载体,天根的感受态细胞,进行转化,可是涂板之后,菌落少,测的序列全是空载体,求教:会是哪些原因导致的?我的目的基因片段大概3-4K左右,是不是和片段大小有关?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-19 20:47:19
如果感受态转化效率不行,肯定长出的单菌落就少。但买的感受态应该都问题不大,我们都是自己做的。
TA克隆Amp抗性我们一般用的是100mg/l,理论上只要多加的不多,影响也应该不大。
还有就是4楼提到的Taq酶,很多 ...

嗯,我用普通的Taq酶加尾,可是回收纯化之后,再连接,涂板,就没有长出菌落,或者只有一两个斑,是不是连接的问题?还是和我的片段太大有关系?
9楼2013-06-21 09:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hellohuo(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:07:53
3~4K是有点大,最好是16℃过夜。
做蓝白筛选,减少假阳性。
感受态也会有影响,可以做一个阳性对照。
每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-19 16:06:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-19 16:06:17
3~4K是有点大,最好是16℃过夜。
做蓝白筛选,减少假阳性。
感受态也会有影响,可以做一个阳性对照。

感受态也会有影响吗?还有一个问题,就是如果抗生素加的会多一些,对菌落的形成是不是也有一定的影响?
3楼2013-06-19 16:58:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:08:02
你的Taq酶是什么牌子,p产物有A 尾巴吗?
还有就是检查你的T4酶,是否活性足够高。
★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2013-06-19 17:03:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 +3 ziyangfang 2026-08-25 3/150 2026-08-25 13:14 by huagongfeihu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见