应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因·
51/1返回列表
查看: 3490  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因· 已有1人参与

克隆基因，用PMD19-T载体，天根的感受态细胞，进行转化，可是涂板之后，菌落少，测的序列全是空载体，求教：会是哪些原因导致的？我的目的基因片段大概3-4K左右，是不是和片段大小有关？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-19 15:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-19 21:36:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-19 16:58:47
感受态也会有影响吗？还有一个问题，就是如果抗生素加的会多一些，对菌落的形成是不是也有一定的影响？...

如果感受态转化效率不行，肯定长出的单菌落就少。但买的感受态应该都问题不大，我们都是自己做的。
TA克隆Amp抗性我们一般用的是100mg/l，理论上只要多加的不多，影响也应该不大。
还有就是4楼提到的Taq酶，很多高保真的Taq酶不能在3‘末端加A，这样你就得自己加，具体方法你可以再网上找找，或者买个加A kit。
顺带说一下，如果你做TA克隆是为了下一步其他载体构建，建议不用做TA克隆，直接对PCR产物进行酶切，然后连接到载体上，当然，这中间有很多纯化的步骤。
赞一下 回复此楼
每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
6楼2013-06-19 20:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hellohuo(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:07:53
3~4K是有点大，最好是16℃过夜。
做蓝白筛选，减少假阳性。
感受态也会有影响，可以做一个阳性对照。
赞一下 回复此楼
每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-19 16:06:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-19 16:06:17
3~4K是有点大，最好是16℃过夜。
做蓝白筛选，减少假阳性。
感受态也会有影响，可以做一个阳性对照。

感受态也会有影响吗？还有一个问题，就是如果抗生素加的会多一些，对菌落的形成是不是也有一定的影响？
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-19 16:58:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:08:02
你的Taq酶是什么牌子，p产物有A 尾巴吗？
还有就是检查你的T4酶，是否活性足够高。
赞一下 回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2013-06-19 17:03:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭