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天叶之羽

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶的硫酸铵沉淀

我做的酶的纯化,打算首先采用硫酸铵沉淀法从发酵液中得到粗酶,但是硫酸铵浓度到90%,冰箱内过夜后,再8000g离心半小时后,目的酶基本还是在溶液里,没有沉淀出来!我看文献里基本到80%就沉淀出来了。
    现在我有两个疑问:1、是不是因为发酵液中蛋白含量太低(约0.1mg/mL),导致的目的酶在高硫酸氨浓度仍沉淀不出?怎样可以有效地酶没沉淀下来呢?
    2、超滤对酶活有很多损失吗?

希望能在这收集到大家的建议,帮助我实验顺利进行。
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2013-06-07 09:15:25
硫酸铵沉淀对于粗蛋白蛋白浓度要求最好是1mg/ml。如果蛋白质浓度过低,硫酸铵沉淀效果就不太好了,会损失大量的蛋白质。
如果你的体积不是很大,可以超滤浓缩,不会使酶失活的。

超滤浓缩的体积上限可以到多少呢?
7楼2013-06-08 17:19:27
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-06 07:43:57
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:43:46
同一种酶的性质也是有不同的,别人的实验结果怎么说也是别人的,不一定自己的就也那样,以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2013-06-06 03:23:17
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-06-06 03:23:17
同一种酶的性质也是有不同的,别人的实验结果怎么说也是别人的,不一定自己的就也那样,以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。

发酵液需要浓缩后再用硫酸铵沉淀吗?这一步解决不了我的实验进行不下去。
3楼2013-06-06 09:06:16
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sars2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2013-06-06 13:59:24
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:44:00
粗酶液有几升?
硫酸铵沉淀在冰水浴中进行 我们实验室一般敲完硫酸铵冰水浴搅拌1h就可以了 放冰箱过夜效果不好
按理说蛋白量再少也会多少有些沉淀 是不是离心转速不够?我们实验室1W转10min 沉淀就可以出来

超滤要看酶而定,最好在低温下进行 而且 有些酶压力过大容易引起变性

我能想到的就这些 我是新手 有不足之处望请见谅。。
4楼2013-06-06 11:04:32
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