应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶的硫酸铵沉淀
191/2返回列表12下一页
查看: 3545  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

天叶之羽

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶的硫酸铵沉淀

我做的酶的纯化，打算首先采用硫酸铵沉淀法从发酵液中得到粗酶，但是硫酸铵浓度到90%，冰箱内过夜后，再8000g离心半小时后，目的酶基本还是在溶液里，没有沉淀出来！我看文献里基本到80%就沉淀出来了。
    现在我有两个疑问：1、是不是因为发酵液中蛋白含量太低（约0.1mg/mL），导致的目的酶在高硫酸氨浓度仍沉淀不出？怎样可以有效地酶没沉淀下来呢？
    2、超滤对酶活有很多损失吗？

希望能在这收集到大家的建议，帮助我实验顺利进行。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-05 19:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sars2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2013-06-06 13:59:24
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:44:00
粗酶液有几升？
硫酸铵沉淀在冰水浴中进行 我们实验室一般敲完硫酸铵冰水浴搅拌1h就可以了 放冰箱过夜效果不好
按理说蛋白量再少也会多少有些沉淀 是不是离心转速不够？我们实验室1W转10min 沉淀就可以出来

超滤要看酶而定，最好在低温下进行 而且 有些酶压力过大容易引起变性

我能想到的就这些 我是新手 有不足之处望请见谅。。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2013-06-06 11:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-08 00:05:36
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:44:14
硫酸铵沉淀对于粗蛋白蛋白浓度要求最好是1mg/ml。如果蛋白质浓度过低，硫酸铵沉淀效果就不太好了，会损失大量的蛋白质。
如果你的体积不是很大，可以超滤浓缩，不会使酶失活的。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2013-06-07 09:15:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-06 07:43:57
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:43:46
同一种酶的性质也是有不同的，别人的实验结果怎么说也是别人的，不一定自己的就也那样，以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2013-06-06 03:23:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-06-06 03:23:17
同一种酶的性质也是有不同的，别人的实验结果怎么说也是别人的，不一定自己的就也那样，以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。

发酵液需要浓缩后再用硫酸铵沉淀吗？这一步解决不了我的实验进行不下去。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-06 09:06:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sars2012 at 2013-06-06 11:04:32
粗酶液有几升？
硫酸铵沉淀在冰水浴中进行 我们实验室一般敲完硫酸铵冰水浴搅拌1h就可以了 放冰箱过夜效果不好
按理说蛋白量再少也会多少有些沉淀 是不是离心转速不够？我们实验室1W转10min 沉淀就可以出来

超 ...

测最适沉淀浓度都用的100mL粗酶液。。是在冰水浴中加的硫酸铵。。
    请教一下，冰箱过夜会不会因为时间长而导致沉淀出的蛋白复溶呢？
  8000g的转速有蛋白，只是沉淀的目的蛋白很少。
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-06 19:33:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2013-06-07 09:15:25
硫酸铵沉淀对于粗蛋白蛋白浓度要求最好是1mg/ml。如果蛋白质浓度过低，硫酸铵沉淀效果就不太好了，会损失大量的蛋白质。
如果你的体积不是很大，可以超滤浓缩，不会使酶失活的。

超滤浓缩的体积上限可以到多少呢？
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-08 17:19:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 天叶之羽 at 2013-06-08 17:19:27
超滤浓缩的体积上限可以到多少呢？...

看你用什么了？
浓缩管当然是越小越好，切向流过滤的话，可以很多。
赞一下 回复此楼
8楼2013-06-08 19:41:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dshlove at 2013-06-08 19:41:26
看你用什么了？
浓缩管当然是越小越好，切向流过滤的话，可以很多。...

你说的是那种用在离心管里的浓缩管么？？我问的是那种超滤仪。。不过都木有用过。。
赞一下 回复此楼
9楼2013-06-09 21:31:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+2, 谢谢参与 2013-06-10 04:01:56
引用回帖:
9楼: Originally posted by 天叶之羽 at 2013-06-09 21:31:51
你说的是那种用在离心管里的浓缩管么？？我问的是那种超滤仪。。不过都木有用过。。...

将试剂装入Millipore超滤离心管里，根据里面有不同孔径的滤膜Millipore超滤离心管有多种规格，拧上盖子，放在离心机转头里，对侧转头加与它质量大致相同的装入水的离心管，然后离心。
非蛋白质物质的分子量与蛋白质差距很大，只要选一个Millipore超滤离心管的滤膜的孔径（厂家的说明书上已经换算成分子量）能够透过非蛋白质但是不会透过蛋白质的规格的Millipore超滤离心管就行。
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-09 22:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 天叶之羽 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭