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chaojiangtao

银虫 (小有名气)

[求助] DNA降解是否会提高DNA浓度呢?求解(请参考我的实验情况)

第一阶段:
今天做凝胶回收,用TianGen琼脂糖凝胶回收试剂盒,按照说明进行了操作。
最后用洗脱缓冲液EB洗脱的时候,脑子一抽,EB加多了,加了80ul.
用分光度计测其浓度多数都在3ng/ul, OD260/OD280均在1.0左右徘徊(与说明书上的1.7~1.9之间差别比较大)。
怀着侥幸的心理,跑下电泳,看能否出来想要的条带,16个样品,只看到了2条弱弱的目的条带。伤心!

第二阶段:
有同事建议,可以对样品用真空离心烘干机蒸发一下洗脱缓冲液EB,提高下浓度,或许就可以了。
听了建议,让1.5ml离心管放入真空离心烘干机中(条件30度以下,低速旋转),烘干了2个小时,剩下的液体样品,用分光光度计测了一下,浓度多数都在120ng/ul.  OD260/OD280的比值,也上升到1.5左右,虽然与说明书的有差别,但还能接受。为了验证是否有目的条带,就跑了一板电泳,懵了,啥条带也没有。
这是咋回事呢?求解

情况介绍1: 样品烘干前液体体积与烘干后液体体积的比值为4:1。浓度提升的比例达到了40倍,有点不可思议。怀疑,但又不敢确定。

哪位同学碰到这种情况了,帮忙解释下,拜谢了!!
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徒步行走
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 说的在理 2013-06-02 09:14:22
分光光度计检测并不可靠,测出的吸光度值可能是其他杂质,你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA,还是以电泳条带为准。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-05-31 21:15:20
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-06-02 09:17:08
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.
3楼2013-06-01 00:49:45
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chaojiangtao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-01 00:49:45
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.

首先谢谢你的帮助
盐浓度应该会提升四倍。能贡献这么多的浓度指数吗?
30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?
徒步行走
4楼2013-06-01 09:41:23
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chaojiangtao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 21:15:20
分光光度计检测并不可靠,测出的吸光度值可能是其他杂质,你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA,还是以电泳条带为准。

30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?
徒步行走
5楼2013-06-01 09:41:57
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chaojiangtao: 金币+5, 有帮助, 2 2013-06-01 20:11:31
原因只有一个,就是你的回收试剂盒质量不行。我原来也用这个牌子的,后来发生了几次这样的事故,每次回收最后浓度都在5ng以下。就果断放弃这个牌子的。国产的话,我建议使用全式金的,或者上海生工的。
天道酬勤
6楼2013-06-01 14:08:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
chaojiangtao: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-01 20:12:36
引用回帖:
5楼: Originally posted by chaojiangtao at 2013-06-01 09:41:57
30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?...

很有可能,如果DNA降解了的话,分光光度计测出来的值也会很大
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
7楼2013-06-01 16:01:26
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grape_vine

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chaojiangtao at 2013-06-01 09:41:23
首先谢谢你的帮助
盐浓度应该会提升四倍。能贡献这么多的浓度指数吗?
30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?...

不会!
8楼2013-09-12 16:41:24
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