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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA降解是否会提高DNA浓度呢？求解（请参考我的实验情况）
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chaojiangtao

银虫 (小有名气)

[求助] DNA降解是否会提高DNA浓度呢？求解（请参考我的实验情况）

第一阶段：
今天做凝胶回收，用TianGen琼脂糖凝胶回收试剂盒，按照说明进行了操作。
最后用洗脱缓冲液EB洗脱的时候，脑子一抽，EB加多了，加了80ul.
用分光度计测其浓度多数都在3ng/ul, OD260/OD280均在1.0左右徘徊（与说明书上的1.7~1.9之间差别比较大）。
怀着侥幸的心理，跑下电泳，看能否出来想要的条带，16个样品，只看到了2条弱弱的目的条带。伤心！

第二阶段：
有同事建议，可以对样品用真空离心烘干机蒸发一下洗脱缓冲液EB，提高下浓度，或许就可以了。
听了建议，让1.5ml离心管放入真空离心烘干机中（条件30度以下，低速旋转），烘干了2个小时，剩下的液体样品，用分光光度计测了一下，浓度多数都在120ng/ul.  OD260/OD280的比值，也上升到1.5左右，虽然与说明书的有差别，但还能接受。为了验证是否有目的条带，就跑了一板电泳，懵了，啥条带也没有。
这是咋回事呢？求解

情况介绍1： 样品烘干前液体体积与烘干后液体体积的比值为4:1。浓度提升的比例达到了40倍，有点不可思议。怀疑，但又不敢确定。

哪位同学碰到这种情况了，帮忙解释下，拜谢了！！
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徒步行走
1楼 2013-05-31 16:44:03
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 说的在理 2013-06-02 09:14:22
分光光度计检测并不可靠，测出的吸光度值可能是其他杂质，你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA，还是以电泳条带为准。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-05-31 21:15:20
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-06-02 09:17:08
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.
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3楼2013-06-01 00:49:45
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chaojiangtao

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-01 00:49:45
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.

首先谢谢你的帮助
盐浓度应该会提升四倍。能贡献这么多的浓度指数吗？
30℃浓缩后了2个多小时，会不会让回收到的DNA降解呢？
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徒步行走
4楼2013-06-01 09:41:23
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chaojiangtao

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 21:15:20
分光光度计检测并不可靠，测出的吸光度值可能是其他杂质，你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA，还是以电泳条带为准。

30℃浓缩后了2个多小时，会不会让回收到的DNA降解呢？
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徒步行走
5楼2013-06-01 09:41:57
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chaojiangtao: 金币+5, ★有帮助, 2 2013-06-01 20:11:31
原因只有一个，就是你的回收试剂盒质量不行。我原来也用这个牌子的，后来发生了几次这样的事故，每次回收最后浓度都在5ng以下。就果断放弃这个牌子的。国产的话，我建议使用全式金的，或者上海生工的。
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天道酬勤
6楼2013-06-01 14:08:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
chaojiangtao: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-01 20:12:36
引用回帖:
5楼: Originally posted by chaojiangtao at 2013-06-01 09:41:57
30℃浓缩后了2个多小时，会不会让回收到的DNA降解呢？...

很有可能，如果DNA降解了的话，分光光度计测出来的值也会很大
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
7楼2013-06-01 16:01:26
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grape_vine

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chaojiangtao at 2013-06-01 09:41:23
首先谢谢你的帮助
盐浓度应该会提升四倍。能贡献这么多的浓度指数吗？
30℃浓缩后了2个多小时，会不会让回收到的DNA降解呢？...

不会！
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8楼2013-09-12 16:41:24
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