24小时热门版块排行榜    

查看: 2374  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chaojiangtao

银虫 (小有名气)

[求助] DNA降解是否会提高DNA浓度呢?求解(请参考我的实验情况)

第一阶段:
今天做凝胶回收,用TianGen琼脂糖凝胶回收试剂盒,按照说明进行了操作。
最后用洗脱缓冲液EB洗脱的时候,脑子一抽,EB加多了,加了80ul.
用分光度计测其浓度多数都在3ng/ul, OD260/OD280均在1.0左右徘徊(与说明书上的1.7~1.9之间差别比较大)。
怀着侥幸的心理,跑下电泳,看能否出来想要的条带,16个样品,只看到了2条弱弱的目的条带。伤心!

第二阶段:
有同事建议,可以对样品用真空离心烘干机蒸发一下洗脱缓冲液EB,提高下浓度,或许就可以了。
听了建议,让1.5ml离心管放入真空离心烘干机中(条件30度以下,低速旋转),烘干了2个小时,剩下的液体样品,用分光光度计测了一下,浓度多数都在120ng/ul.  OD260/OD280的比值,也上升到1.5左右,虽然与说明书的有差别,但还能接受。为了验证是否有目的条带,就跑了一板电泳,懵了,啥条带也没有。
这是咋回事呢?求解

情况介绍1: 样品烘干前液体体积与烘干后液体体积的比值为4:1。浓度提升的比例达到了40倍,有点不可思议。怀疑,但又不敢确定。

哪位同学碰到这种情况了,帮忙解释下,拜谢了!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

徒步行走
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-06-02 09:17:08
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.
3楼2013-06-01 00:49:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 说的在理 2013-06-02 09:14:22
分光光度计检测并不可靠,测出的吸光度值可能是其他杂质,你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA,还是以电泳条带为准。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-05-31 21:15:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaojiangtao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-01 00:49:45
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.

首先谢谢你的帮助
盐浓度应该会提升四倍。能贡献这么多的浓度指数吗?
30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?
徒步行走
4楼2013-06-01 09:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaojiangtao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 21:15:20
分光光度计检测并不可靠,测出的吸光度值可能是其他杂质,你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA,还是以电泳条带为准。

30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?
徒步行走
5楼2013-06-01 09:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +3 张vvvv 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:25 by 张vvvv
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by 我的船我的海
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
请填处理意见