24小时热门版块排行榜    

查看: 2376  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chaojiangtao

银虫 (小有名气)

[求助] DNA降解是否会提高DNA浓度呢?求解(请参考我的实验情况)

第一阶段:
今天做凝胶回收,用TianGen琼脂糖凝胶回收试剂盒,按照说明进行了操作。
最后用洗脱缓冲液EB洗脱的时候,脑子一抽,EB加多了,加了80ul.
用分光度计测其浓度多数都在3ng/ul, OD260/OD280均在1.0左右徘徊(与说明书上的1.7~1.9之间差别比较大)。
怀着侥幸的心理,跑下电泳,看能否出来想要的条带,16个样品,只看到了2条弱弱的目的条带。伤心!

第二阶段:
有同事建议,可以对样品用真空离心烘干机蒸发一下洗脱缓冲液EB,提高下浓度,或许就可以了。
听了建议,让1.5ml离心管放入真空离心烘干机中(条件30度以下,低速旋转),烘干了2个小时,剩下的液体样品,用分光光度计测了一下,浓度多数都在120ng/ul.  OD260/OD280的比值,也上升到1.5左右,虽然与说明书的有差别,但还能接受。为了验证是否有目的条带,就跑了一板电泳,懵了,啥条带也没有。
这是咋回事呢?求解

情况介绍1: 样品烘干前液体体积与烘干后液体体积的比值为4:1。浓度提升的比例达到了40倍,有点不可思议。怀疑,但又不敢确定。

哪位同学碰到这种情况了,帮忙解释下,拜谢了!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

徒步行走
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-06-02 09:17:08
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.
3楼2013-06-01 00:49:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 说的在理 2013-06-02 09:14:22
分光光度计检测并不可靠,测出的吸光度值可能是其他杂质,你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA,还是以电泳条带为准。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-05-31 21:15:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaojiangtao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-01 00:49:45
真空浓缩后盐的浓度上升不少, 这些都会贡献"浓度"读数.

首先谢谢你的帮助
盐浓度应该会提升四倍。能贡献这么多的浓度指数吗?
30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?
徒步行走
4楼2013-06-01 09:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaojiangtao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 21:15:20
分光光度计检测并不可靠,测出的吸光度值可能是其他杂质,你看到的浓度比例提升可能就是因为这个。有没有DNA,还是以电泳条带为准。

30℃浓缩后了2个多小时,会不会让回收到的DNA降解呢?
徒步行走
5楼2013-06-01 09:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 一志愿华中农业大学071010,总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程(085602)313 分,本科学科评估A类院校化学工程与工艺,诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
信息提示
请填处理意见