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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA如何定量
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] DNA如何定量 已有9人参与

如题，现在有一管DNA，想知道量大概有多少或者是说浓度大概是多少？我看DNA定量一般是用二苯胺法，是否还有其他方法来定量呢，请各位大侠指教，谢谢！
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1楼 2011-06-24 10:35:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
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amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-24 20:16:48
引用回帖:
Originally posted by susanbao at 2011-06-24 12:30:02:
一般来讲，DNA只能半定量，用OD280，要是需要比较准确的结果，可以用萤光定量PCR来做，不过就是需要比较多的设备和试计。

对你的说法持保留意见。

DNA和RNA在260nm处有最大的吸收峰，而蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，定量DNA应该用OD260而不是OD280. 当OD260=1时，对应的双链DNA为50 ug/ml，单链DNA为37 ug/ml，RNA为40 ug/ml，Oligo为33 ug/ml。

楼主要求知道浓度，用分光光度法足矣。

荧光定量PCR是可以定量，可以精确到拷贝数，但需要的成本太高，仪器试剂贵，用在这里是大炮打蚊子，费时费力费钱。如只需知道浓度，远远不如分光光度法实际。

[ Last edited by 西瓜 on 2011-6-24 at 16:34 ]
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8楼2011-06-24 16:33:10
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-24 11:11:41
可以用分光光度法，测OD260.具体可以百度下。
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2楼2011-06-24 10:45:39
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
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西瓜(金币+3): 赞成啊～跟Maker的条带比亮度就ok了。目测定量是做分子的应该掌握的技能。 2011-06-24 10:57:45
正如楼上所说，当然了你也可以跑个电泳看看亮度，用电脑上的照相的软件就可以大致定量的。。。

关键还是看你干什么了？如果做后期的酶切呀什么的，大概看看亮度就可以了。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-06-24 10:53:47
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susanbao

铁虫 (初入文坛)
★
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一般来讲，DNA只能半定量，用OD280，要是需要比较准确的结果，可以用萤光定量PCR来做，不过就是需要比较多的设备和试计。
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4楼2011-06-24 12:30:02
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susanbao

铁虫 (初入文坛)
good
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5楼2011-06-24 12:31:05
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-24 10:53:47:
正如楼上所说，当然了你也可以跑个电泳看看亮度，用电脑上的照相的软件就可以大致定量的。。。

关键还是看你干什么了？如果做后期的酶切呀什么的，大概看看亮度就可以了。。。

我是希望精确知道DNA的量，所以用跑电泳只能估算，这个可能不太准确了！
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6楼2011-06-24 15:09:33
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susanbao at 2011-06-24 12:30:02:
一般来讲，DNA只能半定量，用OD280，要是需要比较准确的结果，可以用萤光定量PCR来做，不过就是需要比较多的设备和试计。

荧光定量PCR对DNA定量的原理是什么啊？我以前对这个几乎就没有涉及，它和普通的PCR有什么区别，PCR不是只是扩增DNA吗？如何能定量呢，麻烦您给我解释一下，可以吗？非常感谢！
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7楼2011-06-24 15:11:48
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wangxy0373

木虫 (著名写手)
★
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在分光光度里，1个OD260双链DNA=50微克/ml，1个OD260单链DNA=30微克/ml
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9楼2011-06-24 16:55:58
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tank1917

金虫 (正式写手)
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西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-24 22:00:21
引用回帖:
Originally posted by guoxingjun2008 at 2011-06-24 15:11:48:
荧光定量PCR对DNA定量的原理是什么啊？我以前对这个几乎就没有涉及，它和普通的PCR有什么区别，PCR不是只是扩增DNA吗？如何能定量呢，麻烦您给我解释一下，可以吗？非常感谢！

什么是Real-Time PCR http://pathmicro.med.sc.edu/pcr/realtime-home.htm
根据lz的情况，建议上分光光度计，Real-Time PCR不推荐
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10楼2011-06-24 16:56:00
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