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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] DNA如何定量已有9人参与

如题,现在有一管DNA,想知道量大概有多少或者是说浓度大概是多少?我看DNA定量一般是用二苯胺法,是否还有其他方法来定量呢,请各位大侠指教,谢谢!
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

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amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-24 20:16:48
引用回帖:
Originally posted by susanbao at 2011-06-24 12:30:02:
一般来讲,DNA只能半定量,用OD280,要是需要比较准确的结果,可以用萤光定量PCR来做,不过就是需要比较多的设备和试计。

对你的说法持保留意见。

DNA和RNA在260nm处有最大的吸收峰,而蛋白质在280nm处有最大的吸收峰,定量DNA应该用OD260而不是OD280. 当OD260=1时,对应的双链DNA为50 ug/ml,单链DNA为37 ug/ml,RNA为40 ug/ml,Oligo为33 ug/ml。

楼主要求知道浓度,用分光光度法足矣。

荧光定量PCR是可以定量,可以精确到拷贝数,但需要的成本太高,仪器试剂贵,用在这里是大炮打蚊子,费时费力费钱。如只需知道浓度,远远不如分光光度法实际。

[ Last edited by 西瓜 on 2011-6-24 at 16:34 ]
8楼2011-06-24 16:33:10
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普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-24 11:11:41
可以用分光光度法,测OD260.具体可以百度下。
2楼2011-06-24 10:45:39
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

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西瓜(金币+3): 赞成啊~跟Maker的条带比亮度就ok了。目测定量是做分子的应该掌握的技能。 2011-06-24 10:57:45
正如楼上所说,当然了你也可以跑个电泳看看亮度,用电脑上的照相的软件就可以大致定量的。。。

关键还是看你干什么了?如果做后期的酶切呀什么的,大概看看亮度就可以了。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-06-24 10:53:47
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susanbao

铁虫 (初入文坛)


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一般来讲,DNA只能半定量,用OD280,要是需要比较准确的结果,可以用萤光定量PCR来做,不过就是需要比较多的设备和试计。
4楼2011-06-24 12:30:02
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susanbao

铁虫 (初入文坛)

5楼2011-06-24 12:31:05
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-24 10:53:47:
正如楼上所说,当然了你也可以跑个电泳看看亮度,用电脑上的照相的软件就可以大致定量的。。。

关键还是看你干什么了?如果做后期的酶切呀什么的,大概看看亮度就可以了。。。

我是希望精确知道DNA的量,所以用跑电泳只能估算,这个可能不太准确了!
6楼2011-06-24 15:09:33
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susanbao at 2011-06-24 12:30:02:
一般来讲,DNA只能半定量,用OD280,要是需要比较准确的结果,可以用萤光定量PCR来做,不过就是需要比较多的设备和试计。

荧光定量PCR对DNA定量的原理是什么啊?我以前对这个几乎就没有涉及,它和普通的PCR有什么区别,PCR不是只是扩增DNA吗?如何能定量呢,麻烦您给我解释一下,可以吗?非常感谢!
7楼2011-06-24 15:11:48
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wangxy0373

木虫 (著名写手)


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在分光光度里,1个OD260双链DNA=50微克/ml,1个OD260单链DNA=30微克/ml
9楼2011-06-24 16:55:58
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tank1917

金虫 (正式写手)

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西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-24 22:00:21
引用回帖:
Originally posted by guoxingjun2008 at 2011-06-24 15:11:48:
荧光定量PCR对DNA定量的原理是什么啊?我以前对这个几乎就没有涉及,它和普通的PCR有什么区别,PCR不是只是扩增DNA吗?如何能定量呢,麻烦您给我解释一下,可以吗?非常感谢!

什么是Real-Time PCR http://pathmicro.med.sc.edu/pcr/realtime-home.htm
根据lz的情况,建议上分光光度计,Real-Time PCR不推荐
10楼2011-06-24 16:56:00
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