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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA怎么定量？？
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA怎么定量？？已有12人参与

各位在做实验的时候ＤＮＡ是怎么定量的啊。我先用分光光度计测的ＤＮＡ浓度，然后根据这个浓度稀释成不同倍数，电泳用λDNA进行比对，为什么同样的浓度两者的亮度不一样啊（比如λDNA20ng,我根据分光光度计测的DNA浓度稀释到20ng）各位有什么好方法吗？因为我想做优化体系的实验DNA确定不准，最后谁知道是多少浓度呢。
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1楼2010-12-26 11:05:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
你后面想做什么实验？
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2楼2010-12-26 11:57:45
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poog502

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
推荐使用专门的核算测定仪，较为准确定量。
楼主要做遗传多样性吗？要是，主要还是引物的筛选。

[ Last edited by poog502 on 2010-12-26 at 12:16 ]
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3楼2010-12-26 12:14:23
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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用微量分光光度计定量啊，只需要1微升就可以了。我们简称核酸蛋白定量仪
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独YY不如众YY！！！
4楼2010-12-26 12:25:19
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2):good 2010-12-27 08:47:09
我用的martSpec3000型核酸定量仪检测的，我的意思比如说我检测的DNA浓度1ul为40ng,但是我用电泳检测的时候这个浓度见不着条带，甚至3ul都没有条带，而λDNA 10ng就很亮啊 ，我不知道到底以哪个为准呢？我后续想筛引物，所以想对PCR体系进行优化   
    我的实验结果显示，用核酸定量的100ng与电泳定量的10ng相当，这里差一个数量级呢，不知道以哪个为准呢

[ Last edited by zqt123_1981 on 2010-12-26 at 15:28 ]
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5楼2010-12-26 13:33:44
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haitian0625

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-28 13:54:43
跑电泳用的成像仪也能定的。
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6楼2010-12-26 17:03:15
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langduiyue

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2010-12-27 08:47:23
如果，是优化PCR体系，电泳定量就够了。 我们做PCR一般是用电泳定一下量。模板的量差不多就行。 10微升的体系，我是 12 ng 到  200ng多差不多。  不低一点比较好
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角逐自我
7楼2010-12-26 21:46:12
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
微量分光光度计每次测的数值都不一样
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在这个纷绕的世俗世界里，能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切，也是一种境界。
8楼2010-12-27 09:01:54
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-12-28 13:54:56
如果你是做PCR，模板的起始量不是很重要，可以在一个非常宽的数量级里头变动
fg、pg、ng级别的都可以
优化PCR体系还是从其他方面入手吧
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9楼2010-12-27 09:16:58
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chuanqizhou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2010-12-26 11:05:11:
各位在做实验的时候ＤＮＡ是怎么定量的啊。我先用分光光度计测的ＤＮＡ浓度，然后根据这个浓度稀释成不同倍数，电泳用λDNA进行比对，为什么同样的浓度两者的亮度不一样啊（比如λDNA20ng,我根据分光光度计测的DN ...

Nanodrop
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改变自己从身体开始
10楼2010-12-27 09:20:15
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