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caohui

银虫 (小有名气)

nanodrop 2000
抬头看看蓝天,放飞梦想!
11楼2010-12-27 09:23:57
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lanying1123

铁虫 (初入文坛)

电泳不如分光光度计
12楼2010-12-27 10:45:40
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by langduiyue at 2010-12-26 21:46:12:
如果,是优化PCR体系,电泳定量就够了。 我们做PCR一般是用电泳定一下量。模板的量差不多就行。 10微升的体系,我是 12 ng 到  200ng多差不多。  不低一点比较好

为啥我用正交设计优化PCR体系,16个组合只有4个组合有条带啊 没有条带这怎么优化啊?
我用单因素逐一优化的时候,第一个因素优化好了在优化第二个因素的时候跑出来的条带很模糊,这又是怎么回事?难道这该死的体系不想让我优化啊
13楼2010-12-28 10:09:50
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
微量分光光度计定量
1微升定量

不过不太准,很容易因为离子或者蛋白残留而影响到你的定量
可以结合电泳电量,那样的话就比较准了
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
14楼2010-12-28 10:42:43
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hfkset

铜虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-01 01:01:00
条带大小不一样,质量一样,亮度也是不一样的
15楼2010-12-28 11:19:12
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hfkset

铜虫 (初入文坛)

不知道你的样品纯不纯,电泳定量就可以,多叫几个同学看看,可以取平均值
16楼2010-12-28 11:19:55
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langduiyue

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-12-28 13:55:27
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2010-12-28 10:09:50:

为啥我用正交设计优化PCR体系,16个组合只有4个组合有条带啊 没有条带这怎么优化啊?
我用单因素逐一优化的时候,第一个因素优化好了在优化第二个因素的时候跑出来的条带很模糊,这又是怎么回事?难道这该死的 ...

正交设计咱没用过,也不会。 一般就是 摸一下退火温度,延伸温度。时间上小调一下。 在就是体系,模板没问题的话。 其他多加点,像 酶,dNTP等。在就是摸一下mg2+梯度 应该就差不多了。 要是还不行,那就是你引物太差劲,引物要是设计不好,其他都是白搭。  LZ 祝你好运!
角逐自我
17楼2010-12-28 13:39:07
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