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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA怎么定量？？
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caohui

银虫 (小有名气)
nanodrop 2000
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抬头看看蓝天，放飞梦想！
11楼2010-12-27 09:23:57
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lanying1123

铁虫 (初入文坛)
电泳不如分光光度计
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12楼2010-12-27 10:45:40
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by langduiyue at 2010-12-26 21:46:12:
如果，是优化PCR体系，电泳定量就够了。 我们做PCR一般是用电泳定一下量。模板的量差不多就行。 10微升的体系，我是 12 ng 到  200ng多差不多。  不低一点比较好

为啥我用正交设计优化PCR体系，16个组合只有4个组合有条带啊 没有条带这怎么优化啊？
我用单因素逐一优化的时候，第一个因素优化好了在优化第二个因素的时候跑出来的条带很模糊，这又是怎么回事？难道这该死的体系不想让我优化啊
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13楼2010-12-28 10:09:50
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
微量分光光度计定量
1微升定量

不过不太准，很容易因为离子或者蛋白残留而影响到你的定量
可以结合电泳电量，那样的话就比较准了
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
14楼2010-12-28 10:42:43
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hfkset

铜虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-01 01:01:00
条带大小不一样，质量一样，亮度也是不一样的
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15楼2010-12-28 11:19:12
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hfkset

铜虫 (初入文坛)
不知道你的样品纯不纯，电泳定量就可以，多叫几个同学看看，可以取平均值
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16楼2010-12-28 11:19:55
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langduiyue

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-12-28 13:55:27
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2010-12-28 10:09:50:

为啥我用正交设计优化PCR体系，16个组合只有4个组合有条带啊 没有条带这怎么优化啊？
我用单因素逐一优化的时候，第一个因素优化好了在优化第二个因素的时候跑出来的条带很模糊，这又是怎么回事？难道这该死的 ...

正交设计咱没用过，也不会。 一般就是 摸一下退火温度，延伸温度。时间上小调一下。 在就是体系，模板没问题的话。 其他多加点，像 酶，dNTP等。在就是摸一下mg2+梯度 应该就差不多了。 要是还不行，那就是你引物太差劲，引物要是设计不好，其他都是白搭。  LZ 祝你好运！
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角逐自我
17楼2010-12-28 13:39:07
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