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静静秋

木虫 (正式写手)

[求助] Tricine胶应该怎么跑? 已有4人参与

最经在做小分子蛋白,试过了17%和Tricine胶,Tricine胶的效果更好,楼主果断决定做Tricine胶,用的是Nature protein上面的配方,用的是两层胶,没有加尿素。电压选用的是30V跑40-50min后改用130V跑至底部,放在4℃环境中电泳时间约为3h,用的是bio-rad的mini型的电泳槽。然后固定染色脱色,出现以下问题:
  1.买的是低分子多肽作为Marker,有5个条带,最下面的两个条带有点拖尾且不清晰,有点弥散的现象,感觉上是没有怎么分开,最重要的,分子量根本对不上。
   2.Marker总是会拖着临近的样品条带,临近Marker的条带总是跑的很丑很丑。
   3.8.8KDa以下的样品条带不清楚,当然这个有可能是样品的问题,但是小分子确实没有被分开的感觉,不清楚。
   楼主下一步的想法是确认Marker应该怎么跑的问题,接着再确认超小分子跑不开的问题,请牛人帮忙解决一下,需要在胶里面加尿素吗?跑胶的电压是不是太高了呢?bio-rad电泳槽是不是只能跑普通胶不能做小分子胶呢?
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但愿,我的天空一直蔚蓝
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露的想念

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 静静秋 at 2013-05-29 23:09:41
自己顶一下,各位跑过小分子胶的大神们请支招,还有我用的是16%的分离胶,目的蛋白的分子量是8KDa,是不是应该用三层胶呢?

你好!请问你的样品是怎么处理,我看nature上37度15min,还有样品的buffer是加的考马斯亮蓝而不是溴酚蓝吗?
10楼2014-10-09 14:43:54
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静静秋

木虫 (正式写手)

自己顶一下,各位跑过小分子胶的大神们请支招,还有我用的是16%的分离胶,目的蛋白的分子量是8KDa,是不是应该用三层胶呢?
但愿,我的天空一直蔚蓝
2楼2013-05-29 23:09:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
静静秋(1949stone代发): 金币+1, 不错 2013-05-30 12:47:02
静静秋: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-03 17:51:47
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样,可以维持与样品相同的压力,就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题,不知道具体情况,最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰,不会拖尾。
3楼2013-05-30 12:34:12
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静静秋

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-30 12:34:12
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样,可以维持与样品相同的压力,就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题,不知道具体情况,最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰,不会拖尾。

我做的是两层胶,是不是三层胶的效果会更好点?
但愿,我的天空一直蔚蓝
4楼2013-06-03 17:51:32
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