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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Tricine胶应该怎么跑？
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静静秋

木虫 (正式写手)

[求助] Tricine胶应该怎么跑？ 已有4人参与

最经在做小分子蛋白，试过了17%和Tricine胶，Tricine胶的效果更好，楼主果断决定做Tricine胶，用的是Nature protein上面的配方，用的是两层胶，没有加尿素。电压选用的是30V跑40-50min后改用130V跑至底部，放在4℃环境中电泳时间约为3h，用的是bio-rad的mini型的电泳槽。然后固定染色脱色，出现以下问题：
  1.买的是低分子多肽作为Marker，有5个条带，最下面的两个条带有点拖尾且不清晰，有点弥散的现象，感觉上是没有怎么分开，最重要的，分子量根本对不上。
   2.Marker总是会拖着临近的样品条带，临近Marker的条带总是跑的很丑很丑。
   3.8.8KDa以下的样品条带不清楚，当然这个有可能是样品的问题，但是小分子确实没有被分开的感觉，不清楚。
   楼主下一步的想法是确认Marker应该怎么跑的问题，接着再确认超小分子跑不开的问题，请牛人帮忙解决一下，需要在胶里面加尿素吗？跑胶的电压是不是太高了呢?bio-rad电泳槽是不是只能跑普通胶不能做小分子胶呢？
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但愿，我的天空一直蔚蓝
1楼 2013-05-29 22:54:03
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露的想念

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 静静秋 at 2013-05-29 23:09:41
自己顶一下，各位跑过小分子胶的大神们请支招，还有我用的是16%的分离胶，目的蛋白的分子量是8KDa，是不是应该用三层胶呢？

你好！请问你的样品是怎么处理，我看nature上37度15min，还有样品的buffer是加的考马斯亮蓝而不是溴酚蓝吗？
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10楼2014-10-09 14:43:54
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静静秋

木虫 (正式写手)
自己顶一下，各位跑过小分子胶的大神们请支招，还有我用的是16%的分离胶，目的蛋白的分子量是8KDa，是不是应该用三层胶呢？
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但愿，我的天空一直蔚蓝
2楼2013-05-29 23:09:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
静静秋(1949stone代发): 金币+1, 不错 2013-05-30 12:47:02
静静秋: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-03 17:51:47
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样，可以维持与样品相同的压力，就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题，不知道具体情况，最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰，不会拖尾。
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3楼2013-05-30 12:34:12
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静静秋

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-30 12:34:12
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样，可以维持与样品相同的压力，就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题，不知道具体情况，最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰，不会拖尾。

我做的是两层胶，是不是三层胶的效果会更好点？
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但愿，我的天空一直蔚蓝
4楼2013-06-03 17:51:32
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