24小时热门版块排行榜    

查看: 1672  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

crazymouse66

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒的连接与转化

大家好,我用一株细菌做完菌液PCR后跑琼脂糖电泳,跑完后做切胶回收,用的是试剂盒(试剂盒稍微有点过期了,但是回收完后我测了下DNA浓度和纯度,还是挺好的),然后再和PMD18T质粒进行质粒连接,连接用了一个晚上,是16度和4度交替连接,然后导入大肠杆菌感受态细胞中,最后涂板,用的是AMP氨苄平板,37度培养。但是现在的情况是:我连着做了两次,到最后平板上都没有菌落长出来,请问这大概是什么情况呢?是不是直接做的菌液PCR不能这样做啊?是否哪一步出现了问题,请大家指点一下。谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sweetoath

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢你们提供的建议,谢谢 2013-06-14 19:18:32
PCR的Taq酶是否具有加A功能?
3楼2013-05-28 16:31:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yangtianyuan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-05-28 17:12:05
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢你们提供的建议,谢谢 2013-06-14 19:18:13
有两种情况:一种是你的质粒有问题,你在确认一下。第二种情况就是你的大肠感受态不知道有没有问题,建议你换个感受态,还有最好就是用新一点的胶回收试剂盒!
2楼2013-05-28 11:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crazymouse66

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sweetoath at 2013-05-28 16:31:04
PCR的Taq酶是否具有加A功能?

没有加A功能的。
4楼2013-05-28 19:51:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crazymouse66

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yangtianyuan at 2013-05-28 11:53:33
有两种情况:一种是你的质粒有问题,你在确认一下。第二种情况就是你的大肠感受态不知道有没有问题,建议你换个感受态,还有最好就是用新一点的胶回收试剂盒!

我们的质粒的话是这学期刚买的。其实对于这个我也有怀疑,因为无论怎样,假阳性的细菌总该长出来几个吧,可是连假阳性的菌也没长。这两次我都用的是别人实验室的感受态细胞,据说是挺好的,所以就直接拿来用了。这次我也在自己做感受态细胞,做完后再试一次吧。
5楼2013-05-28 19:55:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 3/150 2026-08-29 23:14 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:44 by 4qO8zhfjr2AX
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 17:30 by 4FFAWE8HcgUD
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见