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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么还原变性电泳得到的分子量应该大于非还原非变性？？急求！
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lslsdjn

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么还原变性电泳得到的分子量应该大于非还原非变性？？急求！

同一种蛋白，
还原变性电泳条件：2*SDS上样缓冲液，加巯基乙醇，煮沸5min，考马斯染色，得分子量约为67kDa；
非还原非变性电泳条件：2*SDS上样缓冲液不加巯基乙醇，不煮沸，活性染色，的分子量约为45kDa。
按原理来说还原变性电泳得到的分子量应该小于非还原非变性，但是看到一篇文献却是相反，请教各位！多谢多谢！

[ Last edited by lslsdjn on 2013-5-25 at 15:43 ]
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如果有来生，我想做棵草！
1楼 2013-05-25 15:38:41
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

但蛋白有二硫键存在不存在还原剂时候会影响SDS-PAGE的迁移率，但是没有确切的说其表现出的分量量是变大还是变小，这与具体蛋白其本身结构有关.
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8楼2013-05-27 11:19:56
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 辛苦了 2013-05-25 21:45:51
lslsdjn: 金币+5, ★有帮助, 这个不是我做的实验，是我从一篇文献中看到的实验现象，谢谢！ 2013-05-26 10:59:49
你的实验中存在一个问题，就是非还原非变性电泳按照你给的条件实际上已经变性了，因为你加了2*SDS上样缓冲液，里面是有SDS的。
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2楼2013-05-25 20:06:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lslsdjn: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-05-26 11:02:33
煮沸可能引起一些膜蛋白形成aggregate，所以分子量可能会变大。即使不加巯基乙醇、不煮沸，只要加了2*SDS缓冲液，样品也是变性了的，所以是否有活性值得怀疑。
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3楼2013-05-26 02:00:47
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lslsdjn: 金币+5, ★有帮助, 谢谢！ 2013-05-26 11:03:31
这个可以说明你的蛋白中含有二硫键，因此当你不加ME时候，电泳迁移率快，是因为结构更为紧凑。一般非变性胶所有试剂中都不含有SDS。
希望对你有用。
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4楼2013-05-26 06:18:51
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