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lslsdjn

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么还原变性电泳得到的分子量应该大于非还原非变性??急求!

同一种蛋白,
还原变性电泳条件:2*SDS上样缓冲液,加巯基乙醇,煮沸5min,考马斯染色,得分子量约为67kDa;
非还原非变性电泳条件:2*SDS上样缓冲液不加巯基乙醇,不煮沸,活性染色,的分子量约为45kDa。
按原理来说还原变性电泳得到的分子量应该小于非还原非变性,但是看到一篇文献却是相反,请教各位!多谢多谢!

[ Last edited by lslsdjn on 2013-5-25 at 15:43 ]
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如果有来生,我想做棵草!
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lslsdjn

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-25 20:06:03
你的实验中存在一个问题,就是非还原非变性电泳按照你给的条件实际上已经变性了,因为你加了2*SDS上样缓冲液,里面是有SDS的。

我想问的是问什么变性还原电泳条件得到的分子量小于非变性非还原?
如果有来生,我想做棵草!
5楼2013-05-26 11:00:43
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lslsdjn

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-26 06:18:51
这个可以说明你的蛋白中含有二硫键,因此当你不加ME时候,电泳迁移率快,是因为结构更为紧凑。一般非变性胶所有试剂中都不含有SDS。
希望对你有用。

可能这种蛋白活性受SDS影响不大,我还是不太明白,迁移率不是只与分子量大小相关吗?如果有二硫键的话加入巯基乙醇煮沸应该是打断二硫键,分子量减小了?怎么会增大?
如果有来生,我想做棵草!
6楼2013-05-26 11:07:21
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