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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么还原变性电泳得到的分子量应该大于非还原非变性？？急求！
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lslsdjn

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么还原变性电泳得到的分子量应该大于非还原非变性？？急求！

同一种蛋白，
还原变性电泳条件：2*SDS上样缓冲液，加巯基乙醇，煮沸5min，考马斯染色，得分子量约为67kDa；
非还原非变性电泳条件：2*SDS上样缓冲液不加巯基乙醇，不煮沸，活性染色，的分子量约为45kDa。
按原理来说还原变性电泳得到的分子量应该小于非还原非变性，但是看到一篇文献却是相反，请教各位！多谢多谢！

[ Last edited by lslsdjn on 2013-5-25 at 15:43 ]
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如果有来生，我想做棵草！
1楼 2013-05-25 15:38:41
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 辛苦了 2013-05-25 21:45:51
lslsdjn: 金币+5, ★有帮助, 这个不是我做的实验，是我从一篇文献中看到的实验现象，谢谢！ 2013-05-26 10:59:49
你的实验中存在一个问题，就是非还原非变性电泳按照你给的条件实际上已经变性了，因为你加了2*SDS上样缓冲液，里面是有SDS的。
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2楼2013-05-25 20:06:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lslsdjn: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-05-26 11:02:33
煮沸可能引起一些膜蛋白形成aggregate，所以分子量可能会变大。即使不加巯基乙醇、不煮沸，只要加了2*SDS缓冲液，样品也是变性了的，所以是否有活性值得怀疑。
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3楼2013-05-26 02:00:47
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lslsdjn: 金币+5, ★有帮助, 谢谢！ 2013-05-26 11:03:31
这个可以说明你的蛋白中含有二硫键，因此当你不加ME时候，电泳迁移率快，是因为结构更为紧凑。一般非变性胶所有试剂中都不含有SDS。
希望对你有用。
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4楼2013-05-26 06:18:51
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lslsdjn

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-25 20:06:03
你的实验中存在一个问题，就是非还原非变性电泳按照你给的条件实际上已经变性了，因为你加了2*SDS上样缓冲液，里面是有SDS的。

我想问的是问什么变性还原电泳条件得到的分子量小于非变性非还原？
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如果有来生，我想做棵草！
5楼2013-05-26 11:00:43
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lslsdjn

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-26 06:18:51
这个可以说明你的蛋白中含有二硫键，因此当你不加ME时候，电泳迁移率快，是因为结构更为紧凑。一般非变性胶所有试剂中都不含有SDS。
希望对你有用。

可能这种蛋白活性受SDS影响不大，我还是不太明白，迁移率不是只与分子量大小相关吗？如果有二硫键的话加入巯基乙醇煮沸应该是打断二硫键，分子量减小了？怎么会增大？
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如果有来生，我想做棵草！
6楼2013-05-26 11:07:21
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by lslsdjn at 2013-05-26 11:07:21
可能这种蛋白活性受SDS影响不大，我还是不太明白，迁移率不是只与分子量大小相关吗？如果有二硫键的话加入巯基乙醇煮沸应该是打断二硫键，分子量减小了？怎么会增大？...

在非变性电泳中，迁移率不是只与分子量大小有关，还和蛋白本身所带的电荷、蛋白的形状等因素有关。
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7楼2013-05-26 13:42:20
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

但蛋白有二硫键存在不存在还原剂时候会影响SDS-PAGE的迁移率，但是没有确切的说其表现出的分量量是变大还是变小，这与具体蛋白其本身结构有关.
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8楼2013-05-27 11:19:56
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Amber5662

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lslsdjn at 2013-05-26 11:00:43
我想问的是问什么变性还原电泳条件得到的分子量小于非变性非还原？...

请问，您遇到的这个问题有得到解决吗？我今天的非还原SDS-PAGE的条带分子量也小于还原SDS-PAGE的？也一直想不明白。
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9楼2016-07-25 20:01:46
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