| 查看: 3129 | 回复: 7 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
appletree-新虫 (小有名气)
|
[求助]
包涵体复性试剂盒
|
|
| 最近在大肠杆菌中表达目的基因，优化了好多次，可表达的几乎都是包涵体，于是我决定包涵体复性，请问大家用过什么包涵体复性试剂盒？我看网上有卖生工的，不知道好用不？有包涵体复性的步骤吗？感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有163人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 紧急求助！220KDa蛋白纯化。。。
已经有8人回复
- 如何解决包涵体复性沉淀问题？
已经有16人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- 胞内酶不能用超声破碎怎么办？
已经有15人回复
- 中试研究和稳定性考察可以在集团总部下属的了公司研究吗？
已经有6人回复
- 包涵体变性、复性
已经有4人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- TEV酶的纯化出问题了，求解？？、
已经有9人回复
- 渗透冲击法 裂解诱导后的E.coli BL21(DE3)，提纯HIS-tag蛋白，求指导
已经有12人回复
- gst标签，蛋白纯化
已经有25人回复
- 包涵体洗涤后8M尿素不溶解
已经有7人回复
- 脂肪乳+抗肿瘤药，委托中试试验。
已经有10人回复
- 【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
已经有17人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
kabuqinuo89
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 17.2
- 散金: 399
- 红花: 4
- 帖子: 233
- 在线: 104.7小时
- 虫号: 1450948
- 注册: 2011-10-19
- 专业: 生物信息学
8楼2016-06-27 10:04:51
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
appletree-: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-05-18 14:34:06
myprayer: 金币+2, MolEPI+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-18 16:00:59
感谢参与，应助指数 +1
appletree-: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-05-18 14:34:06
myprayer: 金币+2, MolEPI+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-18 16:00:59
|
楼主，你好 我没用过什么其他家生产的蛋白 renaturation的试剂盒，我的蛋白refolding buffer都是我足迹配置的！ 我给你回答最后一个问题吧！ 蛋白复性是一门比较难的学问，很难讲清楚！如果要长篇大论，我最起码可以写个8000字的综述····每个蛋白他的renaturation方法是不同的！我暂时还没有发现一个万能的buffer来用于蛋白的复性！普通蛋白还好点，cytokines就比较难了！好了，长话短说，简单介绍下吧： 1. 在你复性之前，你要先了解你蛋白的物理性质和生化性质，可以通过专门软件和专业网站，例如DNAman 和NCBI。 2.根据你的protein pI值，来选择合适的缓冲体系，Tris，PBS，或者HEPES等 3.可以通过添加一些盐来增加蛋白的溶解性，例如NaCl；也可以通过添加一些抑制剂来增强蛋白的稳定性，如EDTA,PMSF等 4.适当的添加Arg可以又利于蛋白的refolding，最好在0.4~0.8之间选择，这期间复性的protein是有活性的。 5.也可以通过添加低浓度的变性剂来提高蛋白的复性，Urea<2M，Gin-Hcl<0.8M 6.如果你的蛋白中含有二硫键，要加入氧化还原系统来refolding！如GSH和GSSG，半胱氨酸和胱氨酸等，一般比例为10:1. 7.去垢剂的加入，有利于膜蛋白的refolding，关键在于去垢剂种类的选择：离子型还是非离子型的呢？ 8. 复性时间的长短。一般变性剂在搅拌的情况下3~4h就能透析掉，如果在这个时候不沉淀，你就放心大胆的复性吧！最好复性一天（24h）！当然不排除意外！！  9.复性最好是逐步降低你的变性剂浓度，可以更好与你的renaturation，避免蛋白发生aggregation，从而沉淀！ 10.在你将你的protein 复性之前，先要做个复性小试！取少量的蛋白复性试试，离心观察是否有沉淀！没有，你就可以放心大胆的做了！不排除小试不沉，大量的就沉。这种情况很少！希望你不那么倒霉！！  好吧，就这么多吧！我去吃饭了！都大了快一个小时了！ |
2楼2013-05-18 12:48:56
appletree-
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 499.4
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 16小时
- 虫号: 1726979
- 注册: 2012-03-30
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
3楼2013-05-18 14:35:07
appletree-
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 499.4
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 16小时
- 虫号: 1726979
- 注册: 2012-03-30
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
4楼2013-05-18 14:36:08