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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体变性、复性
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liuheluo

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 包涵体变性、复性

如题，最近表达一个蛋白，表达条件摸索过后发现还是全部为包涵体，故考虑采用变性、复性的方法。
结果有可溶性的蛋白，但是无活性，查阅文献发现，该蛋白需要一个辅基，且与该蛋白是共价结合
我不知道共价结合的辅基，是否即使我在复性过程中加入，也无法与该蛋白形成共价结合了呢？
是否意味着该蛋白无法变性、复性了呢？
请高手解答
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1楼2012-02-08 17:01:11
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liuheluo

捐助贵宾 (小有名气)
谢谢西瓜，不过我也不是新虫，就是不知道为什么之前那个木虫号密码居然能被盗，不得以就新申请了。。。
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2楼2012-02-08 21:14:00
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+3): 鼓励应助，多多交流哦 2012-02-09 13:52:57
liuheluo(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢，我再试试看吧，之前有个类似的酶可溶性表达了，这个就不行 2012-02-09 15:41:46
体外表达后的蛋白即使你加入辅基成分也不大可能形成有活性的酶分子，因为这一过程是在一些酶催化下完成的。建议你试试信号肽表达你的目标蛋白，包涵体变性复性方法可能不适合你。
再有你现在用的表达宿主能否使得你的目标蛋白与辅基共价连接还需要确定。
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3楼2012-02-09 13:37:06
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ranger04

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以试试带有辅助溶解性标签的载体，比如pET32a等，得到tag-fusion目的蛋白之后用蛋白酶切点标签就可以了。
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4楼2012-07-12 13:45:19
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
能否说说具体是什么蛋白？
太笼统不好交流的。
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生物资源交流QQ群：1044518333
5楼2012-07-12 14:53:40
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