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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】膜蛋白表达
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noheartman

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】膜蛋白表达 已有9人参与

有没有做膜蛋白表达的，我做了一个，换了N个载体，做了突变，不是不表达，就是以包涵体的形式表达，真是杯具。
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1楼 2010-07-28 10:32:40
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bunny0512

银虫 (小有名气)
我师兄做了...很顺利  就是表达量少  荧光显示才一点点
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在哪里~在哪里见过你~
2楼2010-07-28 10:35:47
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
也做膜蛋白，但是我们只是验证基因的功能，不做提取....
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-08-02 10:55:53
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看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
貌似膜蛋白确实很麻烦的事
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2010-08-02 17:45:11
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★ ★
看天(金币+2):鼓励新人交流 2010-08-05 11:40:21
你做膜蛋白的目的是干什么？这样以便于给你一些合适的建议，即使在包涵体内，有些膜蛋白也是可以纯化的，甚至可以得到由活性的东西。
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5楼2010-08-05 09:56:19
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无情草

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-08-02 10:55:53:
也做膜蛋白，但是我们只是验证基因的功能，不做提取....

我也是验证基因功能，但是表达也不顺利，详细情况能否请教一下你啊？谢谢
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最初的梦想
6楼2010-10-25 20:31:56
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feitiannongying

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主填一下经验吧，我做了一年都没表达出来郁闷死了
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7楼2010-10-27 09:26:36
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kxxin66

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-27 11:51:48
膜蛋白用原核生物表达一般出来就是包涵体，而且透析及稀释等一些文章上常用的方法复性膜蛋白基本不太可行，不是沉淀就是没活性，假若是胞内区的一小段，则相对好复性些。若是你是研究生，想要有活性的蛋白并以此毕业，建议在没有合适的方法前，最好换题。
以上是个人建议。
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8楼2010-10-27 11:31:27
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
膜蛋白确实比较难做，呵呵。甚至你的蛋白里面包含少数跨膜区域都会困难很多很多。要筛载体，宿主。原核不行的话要换到酵母、细胞里面去做。

我个人的意见是，
如果你不是做结晶，而是做功能的话，不妨试试包涵体变性后的重折叠，有可能重新折叠后也是有活性的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2010-10-27 14:08:46
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indica

铁虫 (初入文坛)
试试C41菌株或者T7 express,
更适合做膜蛋白。
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10楼2012-07-07 11:05:25
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