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noheartman

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】膜蛋白表达 已有9人参与

有没有做膜蛋白表达的,我做了一个,换了N个载体,做了突变,不是不表达,就是以包涵体的形式表达,真是杯具。
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bunny0512

银虫 (小有名气)

我师兄做了...很顺利  就是表达量少  荧光显示才一点点
在哪里~在哪里见过你~
2楼2010-07-28 10:35:47
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
也做膜蛋白,但是我们只是验证基因的功能,不做提取....
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-08-02 10:55:53
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看天

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
貌似膜蛋白确实很麻烦的事
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
4楼2010-08-02 17:45:11
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

★ ★
看天(金币+2):鼓励新人交流 2010-08-05 11:40:21
你做膜蛋白的目的是干什么?这样以便于给你一些合适的建议,即使在包涵体内,有些膜蛋白也是可以纯化的,甚至可以得到由活性的东西。
5楼2010-08-05 09:56:19
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无情草

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-08-02 10:55:53:
也做膜蛋白,但是我们只是验证基因的功能,不做提取....

我也是验证基因功能,但是表达也不顺利,详细情况能否请教一下你啊?谢谢
最初的梦想
6楼2010-10-25 20:31:56
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feitiannongying

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主填一下经验吧,我做了一年都没表达出来郁闷死了
7楼2010-10-27 09:26:36
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kxxin66

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-27 11:51:48
膜蛋白用原核生物表达一般出来就是包涵体,而且透析及稀释等一些文章上常用的方法复性膜蛋白基本不太可行,不是沉淀就是没活性,假若是胞内区的一小段,则相对好复性些。若是你是研究生,想要有活性的蛋白并以此毕业,建议在没有合适的方法前,最好换题。
以上是个人建议。
8楼2010-10-27 11:31:27
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
膜蛋白确实比较难做,呵呵。甚至你的蛋白里面包含少数跨膜区域都会困难很多很多。要筛载体,宿主。原核不行的话要换到酵母、细胞里面去做。

我个人的意见是,
如果你不是做结晶,而是做功能的话,不妨试试包涵体变性后的重折叠,有可能重新折叠后也是有活性的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2010-10-27 14:08:46
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indica

铁虫 (初入文坛)

试试C41菌株或者T7 express,
更适合做膜蛋白。
10楼2012-07-07 11:05:25
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