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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】膜蛋白表达
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】膜蛋白表达 已有5人参与

请问表达膜蛋白的时候是用分泌型表达载体呢？还是胞内表达载体呢？

回收蛋白的时候，蛋白是不是在培养基内啊？
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1楼 2010-05-18 17:54:31
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biogefart

木虫 (著名写手)
阳性阴性细菌？真核原核？
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闹太套
2楼2010-05-18 18:04:53
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
真核

如果可以能否详细一点，自己基础实在太差，谢谢啦
引用回帖:
Originally posted by biogefart at 2010-05-18 18:04:53:
阳性阴性细菌？真核原核？

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3楼2010-05-18 18:45:26
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
zcqcau(金币+3):谢谢你哦，如果用分泌性载体，膜蛋白还是有可能不会分泌到培养基是么？ 2010-05-20 10:43:35
引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2010-05-18 17:54:31:
请问表达膜蛋白的时候是用分泌型表达载体呢？还是胞内表达载体呢？

回收蛋白的时候，蛋白是不是在培养基内啊？

1)最好两种载体都要试验一下。另外，还有链霉菌表达，要是你的蛋白在大肠杆菌内表达不好的话。

2）在大肠杆菌宿主里，膜蛋白比较难表达一些，尤其是真核的。

以上两种载体表达的膜蛋白，很有可能就是包涵体。
因此，回收蛋白的时候，这类蛋白很可能就是在胞内，或菌体的内膜上。

不大可能到培养基中，除非发酵的时候菌体破裂死亡了。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2010-05-20 08:19:41
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
如果用分泌性载体，膜蛋白还是有可能不会分泌到培养基是么？
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2010-05-20 08:19:41:


1)最好两种载体都要试验一下。另外，还有链霉菌表达，要是你的蛋白在大肠杆菌内表达不好的话。

2）在大肠杆菌宿主里，膜蛋白比较难表达一些，尤其是真核的。

以上两种载体表达的膜蛋白，很有可能就是包 ...

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5楼2010-05-20 10:44:12
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boystrong

银虫 (正式写手)
膜蛋白表达一直是个困难的事情，但我们实验室成功的表达了某物种的膜蛋白。表达膜蛋白要看你用什么系统呢，要是大肠杆菌的话，你需要好的表达载体与表达菌，要么就用真核表达系统。一般的TAKARA的丑一点的质粒与表达菌没有用的。
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梦想追风
6楼2010-05-20 12:04:13
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boystrong

银虫 (正式写手)
另外，分泌到培养基里面，我们实验室也鉴定过，有的的确有，但不完全是正确的蛋白三级以上结构。
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梦想追风
7楼2010-05-20 12:05:27
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
表达膜蛋白的话，蛋白质应该会在什么地方（菌株沉淀还是培养基）提取呢？
引用回帖:
Originally posted by boystrong at 2010-05-20 12:04:13:
膜蛋白表达一直是个困难的事情，但我们实验室成功的表达了某物种的膜蛋白。表达膜蛋白要看你用什么系统呢，要是大肠杆菌的话，你需要好的表达载体与表达菌，要么就用真核表达系统。一般的TAKARA的丑一点的质粒与表 ...

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8楼2010-05-20 13:47:20
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boystrong

银虫 (正式写手)
这个需要跑胶鉴定了，培养基、上清、沉淀都需要跑一下看看
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梦想追风
9楼2010-05-20 13:49:24
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hellolin

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1039542楼: Originally posted by boystrong at 2010-05-20 12:04:13
膜蛋白表达一直是个困难的事情，但我们实验室成功的表达了某物种的膜蛋白。表达膜蛋白要看你用什么系统呢，要是大肠杆菌的话，你需要好的表达载体与表达菌，要么就用真核表达系统。一般的TAKARA的丑一点的质粒与表达 ...

请问一下你们原核表达膜蛋白用的是什么载体和菌株
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scienceguy
10楼2012-09-23 10:35:24
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