应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助双酶切切不开
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
221/3返回列表123下一页
查看: 1239  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

囧囧俏

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助双酶切切不开

将一个500bp的基因连到载体PET26b上，pcr结果阳性，酶切切不开，挑了好几个样都是如此，送去测序后证明基因在载体上
现在要将一个500的基因连在已有500片段的PET26上，又是切不开？
求解决方案！！谢谢各位
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-04 19:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-05-04 19:52:59
囧囧俏(amisking代发): 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-05-04 19:53:07
测序结果有没有看那两个酶切位点序列是否正确？
或者，酶失活了，换新酶！
赞一下 回复此楼
做实验就是和上帝玩游戏！
3楼2013-05-04 19:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说说你具体的酶切过程，用的是哪两个酶？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-05-04 19:14:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些酶切位点容易甲基化就会导致你说的这种情况，但是还是要看你的到底怎么回事，没说清楚
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-04 20:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by senix at 2013-05-04 19:46:06
测序结果有没有看那两个酶切位点序列是否正确？
或者，酶失活了，换新酶！

酶切位点正确 两个酶没有问题
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-05 15:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-05-04 19:14:13
说说你具体的酶切过程，用的是哪两个酶？

BamhI XholI Kbuffer
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-05 15:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-04 20:36:44
有些酶切位点容易甲基化就会导致你说的这种情况，但是还是要看你的到底怎么回事，没说清楚

测序后酶切位点没有突变
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-05 15:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by senix at 2013-05-04 19:46:06
测序结果有没有看那两个酶切位点序列是否正确？
或者，酶失活了，换新酶！

两个位点正确 酶是新的没问题
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-05 15:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-07 08:35:53
内切酶一般情况下对样品中离子，蛋白，糖类等物质比较敏感，要完成好的酶切效果，干净的样品是必须的。在你整个实验中，没有发现你对样品的任何处理，是不是直接拿质粒酶切？我建议将提取好的质粒使用酚氯仿法抽提去除离子和蛋白等杂质。然后再酶切。
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-06 08:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-06 08:17:10
内切酶一般情况下对样品中离子，蛋白，糖类等物质比较敏感，要完成好的酶切效果，干净的样品是必须的。在你整个实验中，没有发现你对样品的任何处理，是不是直接拿质粒酶切？我建议将提取好的质粒使用酚氯仿法抽提去 ...

质粒是用上海生工的试剂盒提取的，以前也是用这个提取后直接酶切没有任何问题
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-06 09:59:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 囧囧俏 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武理车辆专硕总分 281 求调剂 +4 上岸研究生. 2026-04-02 4/200 2026-04-07 09:52 by 加油向未来啊
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 09:25 by 小黑不怕难
[考研] 336求调剂，一志愿中科大 +7 墨彧 yuyu 2026-04-06 7/350 2026-04-07 08:58 by Jaylen.
[考研] 一志愿生物与医药，296分，求调剂 +11 66鹿 2026-04-03 13/650 2026-04-06 21:45 by 52305043001
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 385分 生物学（071000）求调剂 +12 qf626 2026-04-01 12/600 2026-04-06 17:36 by 52305043001
[考研] 化学调剂求助 +8 LULONG1 2026-04-03 8/400 2026-04-06 10:26 by dongzh2009
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +15 路痴小琪 2026-04-05 15/750 2026-04-06 09:27 by cql1109
[考研] 求调剂 +11 熊二想上岸 2026-04-04 11/550 2026-04-05 22:21 by 醉翁wl
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +10 Naiko 2026-04-04 10/500 2026-04-05 09:40 by sam3303
[考研] 286求调剂 +3 草木不言 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:40 by lbsjt
[考研] 调剂 +9 19945159693 2026-04-03 10/500 2026-04-04 20:16 by dongzh2009
[考研] 材料295 +13 小英11 2026-04-03 14/700 2026-04-04 09:02 by 来看流星雨10
[考研] 265求调剂 +17 林深温澜 2026-04-01 20/1000 2026-04-04 01:09 by userper
[考研] 282求调剂 +20 ycy1201 2026-04-01 22/1100 2026-04-04 00:42 by userper
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 071000生物学调剂 +8 知昭蔓 2026-04-02 8/400 2026-04-03 10:36 by macy2011
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭