应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助双酶切切不开
221/3返回列表123下一页
查看: 1407  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

囧囧俏

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助双酶切切不开

将一个500bp的基因连到载体PET26b上，pcr结果阳性，酶切切不开，挑了好几个样都是如此，送去测序后证明基因在载体上
现在要将一个500的基因连在已有500片段的PET26上，又是切不开？
求解决方案！！谢谢各位
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-04 19:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说说你具体的酶切过程，用的是哪两个酶？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-05-04 19:14:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-05-04 19:52:59
囧囧俏(amisking代发): 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-05-04 19:53:07
测序结果有没有看那两个酶切位点序列是否正确？
或者，酶失活了，换新酶！
赞一下 回复此楼
做实验就是和上帝玩游戏！
3楼2013-05-04 19:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些酶切位点容易甲基化就会导致你说的这种情况，但是还是要看你的到底怎么回事，没说清楚
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-04 20:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by senix at 2013-05-04 19:46:06
测序结果有没有看那两个酶切位点序列是否正确？
或者，酶失活了，换新酶！

酶切位点正确 两个酶没有问题
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-05 15:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-05-04 19:14:13
说说你具体的酶切过程，用的是哪两个酶？

BamhI XholI Kbuffer
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-05 15:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-04 20:36:44
有些酶切位点容易甲基化就会导致你说的这种情况，但是还是要看你的到底怎么回事，没说清楚

测序后酶切位点没有突变
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-05 15:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by senix at 2013-05-04 19:46:06
测序结果有没有看那两个酶切位点序列是否正确？
或者，酶失活了，换新酶！

两个位点正确 酶是新的没问题
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-05 15:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-07 08:35:53
内切酶一般情况下对样品中离子，蛋白，糖类等物质比较敏感，要完成好的酶切效果，干净的样品是必须的。在你整个实验中，没有发现你对样品的任何处理，是不是直接拿质粒酶切？我建议将提取好的质粒使用酚氯仿法抽提去除离子和蛋白等杂质。然后再酶切。
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-06 08:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-06 08:17:10
内切酶一般情况下对样品中离子，蛋白，糖类等物质比较敏感，要完成好的酶切效果，干净的样品是必须的。在你整个实验中，没有发现你对样品的任何处理，是不是直接拿质粒酶切？我建议将提取好的质粒使用酚氯仿法抽提去 ...

质粒是用上海生工的试剂盒提取的，以前也是用这个提取后直接酶切没有任何问题
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-06 09:59:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 囧囧俏 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:22 by o3EMxHUAQDtS
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:12 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭