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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-05-05 15:08:01
测序后酶切位点没有突变...

甲基化不能理解为是碱基突变,只是那个位点上不能被酶切开了
11楼2013-05-06 11:25:57
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意孤城_

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-05-05 15:08:01
测序后酶切位点没有突变...

你用的是哪些酶?
12楼2013-05-06 11:26:56
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

xholI bamhi

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
13楼2013-05-06 13:16:31
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-07 08:36:11
首先,检查你所用的这两支酶是否好用!(切其他样品做个对照)
对你的本次质粒,用两种酶分别酶切,检查是哪个酶切不开?

如果测序,这两个酶切位点都存在,上述两项都检查了,还是切不开的话,那就这个质粒被甲基化啦!
必须将该质粒重新转化到不能甲基化的感受态细胞中,这个问题就可以解决了!
14楼2013-05-07 07:05:41
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-05-06 09:59:26
质粒是用上海生工的试剂盒提取的,以前也是用这个提取后直接酶切没有任何问题...

真心建议你确定一下你的样品是不是干净。
15楼2013-05-07 08:21:07
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先单酶切看看,回收后再进行酶切,一般没问题的
一花一世界、一叶一菩提
16楼2013-05-07 12:05:01
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

行再试试吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
17楼2013-05-08 07:45:30
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guoyzg

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有没有阴性对照?看看有没有引物或水污染。
18楼2013-05-08 08:06:06
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by guoyzg at 2013-05-08 08:06:06
有没有阴性对照?看看有没有引物或水污染。

pcr过程中阴阳对照成立 而且已经是测序正确的东西 切不开
19楼2013-05-08 10:30:37
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-06 11:26:56
你用的是哪些酶?...

请问XholI BamHI 甲基化的特征序列是什么
20楼2013-05-09 14:56:16
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