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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助双酶切切不开

将一个500bp的基因连到载体PET26b上,pcr结果阳性,酶切切不开,挑了好几个样都是如此,送去测序后证明基因在载体上
现在要将一个500的基因连在已有500片段的PET26上,又是切不开?
求解决方案!!谢谢各位
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-07 08:36:11
首先,检查你所用的这两支酶是否好用!(切其他样品做个对照)
对你的本次质粒,用两种酶分别酶切,检查是哪个酶切不开?

如果测序,这两个酶切位点都存在,上述两项都检查了,还是切不开的话,那就这个质粒被甲基化啦!
必须将该质粒重新转化到不能甲基化的感受态细胞中,这个问题就可以解决了!
14楼2013-05-07 07:05:41
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
说说你具体的酶切过程,用的是哪两个酶?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-05-04 19:14:13
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-05-04 19:52:59
囧囧俏(amisking代发): 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-05-04 19:53:07
测序结果有没有看那两个酶切位点序列是否正确?
或者,酶失活了,换新酶!
做实验就是和上帝玩游戏!
3楼2013-05-04 19:46:06
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有些酶切位点容易甲基化就会导致你说的这种情况,但是还是要看你的到底怎么回事,没说清楚
4楼2013-05-04 20:36:44
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