24小时热门版块排行榜    

查看: 3157  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhuqinjian

金虫 (小有名气)

[求助] SaII和BamHI双酶切切不开

我用T载体与目的片段连接后,导入JM109中,用菌落PCR也能P出目的片段,提取质粒后PCR也能P出来,电泳跑出来的片段也正确(环状片段跑出来有3条带),但是用SaII和BamHI双酶切就是切不出来,只有一条带。求大神指导啊?是不是只是单酶切了啊?为啥双酶切切不出来呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

坚定方向,坚持下去
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuqinjian

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by chenyuqin at 2013-05-03 09:25:18
考虑下有没有甲基化位点??如果有的话要换无甲基化酶的菌株

我是用的JM109,这个菌株貌似很少有甲基化的现象吧
坚定方向,坚持下去
9楼2013-05-03 11:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+5, 有帮助, 单酶切做了下,发现Sal I没有切开,哎不知道怎么回事 2013-05-02 11:01:09
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:23
分别做单切,确定是那个酶不能工作!此外,PCR的鉴定时候是否有加入阴性与阳性对照,我想担心你所看到的片段是都就是目的片段!希望对你有用!
2楼2013-05-02 10:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+3, 有帮助, 我是用捷瑞的试剂盒提的质粒,我觉得应该不是这个问题吧 2013-05-02 11:02:21
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:31
酶切之前,样品质粒要进行除酶,除盐,除乙醇等处理。一般就是酚氯仿抽提,技术要过关,不要在后面醇沉时留下太多的乙醇。上面说的单酶切验证酶是否失效是可行的,但是样品必须干净。内切酶很受离子和乙醇等物质影响的。
3楼2013-05-02 10:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+5, 有帮助, 的确是这样的,我考虑重新连T载体再做一下,然后再送去测序 2013-05-02 11:03:49
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:38
gyesang: 回帖置顶 2013-05-02 12:01:46
用载体上的引物对插入片段测序,最靠谱
4楼2013-05-02 11:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +3 睿08 2026-03-17 5/250 2026-03-17 22:01 by 睿08
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +8 曦熙兮 2026-03-15 8/400 2026-03-17 20:31 by xilongliang
[考研] 344求调剂 +4 knight344 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:27 by ruiyingmiao
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见