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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » PCR-DGGE实验中PCR总出现非特异条带，求帮助！
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qqray

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR-DGGE实验中PCR总出现非特异条带，求帮助！

各位大神，用细菌通用引物PRBA338F（341F） and PRUN518R（534R）扩V3可变区，总没法获得单一条带（以前从未遇到），求大神帮忙分析下，谢谢了！
   PCR体系50ul：10*EX buffer 5uL; dNTP 4uL；20uM引物各1uL；EX Taq（TaKaRa） 0.6uL（5U/uL）；模板1uL。
   PCR反应：94度5min；94度1min，55度1min，72度1min，共30个循环；72度延伸10min。
   电泳染料是Gel-red，用的0.5*TBE缓冲液，电压110V。

PCR图.jpg



DNA2副本.jpg
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1楼 2013-04-28 17:15:05
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qqray: 金币+1, ★有帮助, 谢谢，最后实验结果是TaKaRa的这批酶出了问题，换天根的了 2013-06-04 09:37:30
1.稀释DNA后再扩增看看，提高退火温度。
2.建议胶回收，特异性扩增太明显。
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一路蚯蚓
2楼2013-04-30 16:37:14
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
qqray: 金币+1, ★有帮助, 最后是酶的问题 2013-06-04 09:38:04
PCR反应：94度5min；9430 S，55度30 S，72度30 S，共30个循环；72度延伸10min。
调整为以上程序看看。
如果还不行，那就只能更换新的引物来做。
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3楼2013-05-02 08:53:40
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