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qqray

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR-DGGE实验中PCR总出现非特异条带,求帮助!

各位大神,用细菌通用引物PRBA338F(341F) and PRUN518R(534R)扩V3可变区,总没法获得单一条带(以前从未遇到),求大神帮忙分析下,谢谢了!
   PCR体系50ul:10*EX buffer 5uL; dNTP 4uL;20uM引物各1uL;EX Taq(TaKaRa) 0.6uL(5U/uL);模板1uL。
   PCR反应:94度5min;94度1min,55度1min,72度1min,共30个循环;72度延伸10min。
   电泳染料是Gel-red,用的0.5*TBE缓冲液,电压110V。

PCR图.jpg



DNA2副本.jpg
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qqray: 金币+1, 有帮助, 谢谢,最后实验结果是TaKaRa的这批酶出了问题,换天根的了 2013-06-04 09:37:30
1.稀释DNA后再扩增看看,提高退火温度。
2.建议胶回收,特异性扩增太明显。
一路蚯蚓
2楼2013-04-30 16:37:14
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


qqray: 金币+1, 有帮助, 最后是酶的问题 2013-06-04 09:38:04
PCR反应:94度5min;9430 S,55度30 S,72度30 S,共30个循环;72度延伸10min。
调整为以上程序看看。
如果还不行,那就只能更换新的引物来做。
3楼2013-05-02 08:53:40
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