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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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478203301

金虫 (小有名气)

[求助] his-tag抗不出来

我们请公司构建的neuritin蛋白,以pcDNA3.1为载体,tag标签在C端,在NCBI上blast序列比对也是正确的,但是用his标签一直抗不出来,也换过几家抗体,都抗不出来,有人遇到过同样的问题吗?
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-28 11:04:06
你首先需要确定的是你的蛋白是否表达,3.1用于哺乳动物细胞(CHO居多)。那么我建议对细胞内产物和培养基soup一起进行WB,且在WB中加入内参保重,整个WB过程没有问题。
好运
5楼2013-04-28 03:15:14
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2013-04-27 20:59:00
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478203301

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-27 20:59:00
“]his-tag抗不出来 ”“his标签一直抗不出来”
好山寨的表述啊。

嗯 对 表述有误  应该是  我们请公司构建的neuritin 蛋白,以pcDNA3.1作为载体,his标签在C端,构建回来后序列比对也是正确的,但是用his抗体一直抗不出来,换过几家公司的抗体,都没有抗出来,希望高手予以指点  这样行吗?  阁下有高见吗?
3楼2013-04-27 22:59:12
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 478203301 at 2013-04-27 22:59:12
嗯 对 表述有误  应该是  我们请公司构建的neuritin 蛋白,以pcDNA3.1作为载体,his标签在C端,构建回来后序列比对也是正确的,但是用his抗体一直抗不出来,换过几家公司的抗体,都没有抗出来,希望高手予以指点   ...

我们做WB,一般说压蛋白,杂蛋白,不说抗蛋白哈,1楼说你表述山寨,我想他应该指的是这个
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-04-28 02:31:36
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