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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » his-tag抗不出来
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478203301

金虫 (小有名气)

[求助] his-tag抗不出来

我们请公司构建的neuritin蛋白，以pcDNA3.1为载体，tag标签在C端，在NCBI上blast序列比对也是正确的，但是用his标签一直抗不出来，也换过几家抗体，都抗不出来，有人遇到过同样的问题吗？
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1楼 2013-04-27 20:22:40
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-27 20:59:00
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478203301

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-27 20:59:00
“]his-tag抗不出来 ”“his标签一直抗不出来”
好山寨的表述啊。

嗯 对 表述有误  应该是  我们请公司构建的neuritin 蛋白，以pcDNA3.1作为载体，his标签在C端，构建回来后序列比对也是正确的，但是用his抗体一直抗不出来，换过几家公司的抗体，都没有抗出来，希望高手予以指点  这样行吗？  阁下有高见吗？
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3楼2013-04-27 22:59:12
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 478203301 at 2013-04-27 22:59:12
嗯 对 表述有误  应该是  我们请公司构建的neuritin 蛋白，以pcDNA3.1作为载体，his标签在C端，构建回来后序列比对也是正确的，但是用his抗体一直抗不出来，换过几家公司的抗体，都没有抗出来，希望高手予以指点   ...

我们做WB，一般说压蛋白，杂蛋白，不说抗蛋白哈，1楼说你表述山寨，我想他应该指的是这个
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-04-28 02:31:36
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-28 11:04:06
你首先需要确定的是你的蛋白是否表达，3.1用于哺乳动物细胞（CHO居多）。那么我建议对细胞内产物和培养基soup一起进行WB,且在WB中加入内参保重，整个WB过程没有问题。
好运
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5楼2013-04-28 03:15:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定蛋白表达成功了吗？
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6楼2013-04-28 03:19:15
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2013-04-28 13:24:11
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★
478203301(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-28 13:47:33
本帖内容被屏蔽
8楼2013-04-28 13:28:05
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478203301

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-28 02:31:36
我们做WB，一般说压蛋白，杂蛋白，不说抗蛋白哈，1楼说你表述山寨，我想他应该指的是这个...

好的  学习了  谢谢
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9楼2013-04-28 15:50:28
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478203301

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-04-28 03:15:14
你首先需要确定的是你的蛋白是否表达，3.1用于哺乳动物细胞（CHO居多）。那么我建议对细胞内产物和培养基soup一起进行WB,且在WB中加入内参保重，整个WB过程没有问题。
好运

好的 我再查一下资料  谢谢你啦
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10楼2013-04-28 15:51:29
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