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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物无条带？
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jkamm

金虫 (正式写手)

[求助] PCR产物无条带？

我做DNA电泳有条带（见图），但PCR产物电泳不有条带，找不到原因，求救。
30UL体系：Taq buffer(Mg2+)  3ul
                    dNTPs (2.5mM) 2.4ul
                     上游引物(20um/L)    1.2ul
                    下游引物 (20um/L)    1.2ul
                   ddH2O     22.1ul
                    Taq 酶  0.3U
                   DNA 模版 1.2ul

Z4 B1-G3 2013-04-24 20 小时 53 分钟.jpg
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1楼 2013-04-24 23:25:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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jkamm(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-25 16:55:08
你的DNA模板电泳时点了多少微升？感觉你的模板浓度不小，做PCR应该稀释后使用。
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2楼2013-04-25 01:34:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

此外，你可以检查是不是退火温度不合适，目的片段大小多少，PCR延伸时间是否够。
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3楼2013-04-25 01:39:50
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jkamm

金虫 (正式写手)
想着可能模版问题，不知是什么。DNA上样5ul，最左边一个样是PCR结果较好的DNA对照，这个体系我已将引物减半了，模版没减。
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4楼2013-04-25 08:34:24
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

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jkamm(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-25 16:55:21
不知道正不正确，我们实验室做PCR时，buff：dNTP：引物：Taq=20:4:4:1.还有感觉模板有问题啊。
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5楼2013-04-25 08:38:45
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jkamm

金虫 (正式写手)
模版问题？是太低了还是高了还是。。请指导下新手。
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6楼2013-04-25 09:06:57
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senix

木虫 (小有名气)

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PCR条件如何？模板应该是质粒吧，量应该够了！
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做实验就是和上帝玩游戏！
7楼2013-04-25 09:43:28
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jkamm

金虫 (正式写手)
PCR体系如上已写，只是P不出条带来，苦啊。
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8楼2013-04-25 11:00:00
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-25 16:55:35
P不出条带原因很多啊，不用着急一个一个排除。你用的酶、BUFFER、水都是实验室共用的，别人能做出来证明这些没有问题。

身下就是模板、引物与程序了，引物是你自己设计的么？特异性如何？确定引物没有讲解掉或者你稀释的时候有没有问题。

模板从图上看没有问题，你可以稀释一下模板，做一个退火温度梯度，先试一试吧。
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9楼2013-04-25 11:08:40
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jkamm

金虫 (正式写手)
退火温度梯度做过，通用引物，因虫子很小提取DNA看不到，用电泳检测了，同样方法有的样品可P出来，这几个就P不出来了，是模版需稀释还是是加量啊。
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10楼2013-04-25 16:18:34
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