应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于qRT-PCR内参基因的验证
51/1返回列表
查看: 3584  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 关于qRT-PCR内参基因的验证

看了很多的文献，都是选择总量一定的Total RNA，反转录之后，检测不同处理下，不同内参基因的表达情况，从而选择合适的内参基因。

我的疑问是：假设我选择的内参基因在不同处理下表达量一致，但是肯定有其他基因表达量是不一致的，也就是说内参基因占所有基因表达量的比例不一样，那即使取等量的Total RNA进行比较，又有什么意思呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-22 23:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-24 03:45:09
哦，如果做rRNA基因的话，要用随机引物。oligodT用于反转录mRNA。有些公司的反转录盒子把随机引物和oligodT混起来使用，就没有问题的。

恩，我也是这么认为的~但是我用Takara的反转录试剂盒，用的是Oligo(dT)的引物，但是做了荧光定量，还是能够检测出比较高的表达，这是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-24 10:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wxl007777: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-23 09:42:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-23 12:26:44
你要检测的是mRNA的水平，mRNA占总RNA里的百分比很低，总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变，对总RNA的影响很小。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-04-23 01:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 01:57:21
你要检测的是mRNA的水平，mRNA占总RNA里的百分比很低，总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变，对总RNA的影响很小。

那是否要求在反转录的时候，必须使用随机引物，而不能使用Oligo(dT)的引物？
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 09:43:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wxl007777 at 2013-04-23 09:43:27
那是否要求在反转录的时候，必须使用随机引物，而不能使用Oligo(dT)的引物？...

如果是真核生物的话，随机引物或者oligodT都可以的，一般选用oligodT。原核生物只能用随机引物。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-23 14:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭