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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 关于qRT-PCR内参基因的验证

看了很多的文献,都是选择总量一定的Total RNA,反转录之后,检测不同处理下,不同内参基因的表达情况,从而选择合适的内参基因。

我的疑问是:假设我选择的内参基因在不同处理下表达量一致,但是肯定有其他基因表达量是不一致的,也就是说内参基因占所有基因表达量的比例不一样,那即使取等量的Total RNA进行比较,又有什么意思呢?
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-24 03:45:09
哦,如果做rRNA基因的话,要用随机引物。oligodT用于反转录mRNA。有些公司的反转录盒子把随机引物和oligodT混起来使用,就没有问题的。

恩,我也是这么认为的~但是我用Takara的反转录试剂盒,用的是Oligo(dT)的引物,但是做了荧光定量,还是能够检测出比较高的表达,这是怎么回事呢?
9楼2013-04-24 10:30:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wxl007777: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-23 09:42:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-23 12:26:44
你要检测的是mRNA的水平,mRNA占总RNA里的百分比很低,总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变,对总RNA的影响很小。
2楼2013-04-23 01:57:21
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 01:57:21
你要检测的是mRNA的水平,mRNA占总RNA里的百分比很低,总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变,对总RNA的影响很小。

那是否要求在反转录的时候,必须使用随机引物,而不能使用Oligo(dT)的引物?
3楼2013-04-23 09:43:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wxl007777 at 2013-04-23 09:43:27
那是否要求在反转录的时候,必须使用随机引物,而不能使用Oligo(dT)的引物?...

如果是真核生物的话,随机引物或者oligodT都可以的,一般选用oligodT。原核生物只能用随机引物。
4楼2013-04-23 14:30:03
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