应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于qRT-PCR内参基因的验证
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 3747  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 关于qRT-PCR内参基因的验证

看了很多的文献，都是选择总量一定的Total RNA，反转录之后，检测不同处理下，不同内参基因的表达情况，从而选择合适的内参基因。

我的疑问是：假设我选择的内参基因在不同处理下表达量一致，但是肯定有其他基因表达量是不一致的，也就是说内参基因占所有基因表达量的比例不一样，那即使取等量的Total RNA进行比较，又有什么意思呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-22 23:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wxl007777: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-23 09:42:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-23 12:26:44
你要检测的是mRNA的水平，mRNA占总RNA里的百分比很低，总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变，对总RNA的影响很小。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-04-23 01:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 01:57:21
你要检测的是mRNA的水平，mRNA占总RNA里的百分比很低，总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变，对总RNA的影响很小。

那是否要求在反转录的时候，必须使用随机引物，而不能使用Oligo(dT)的引物？
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 09:43:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wxl007777 at 2013-04-23 09:43:27
那是否要求在反转录的时候，必须使用随机引物，而不能使用Oligo(dT)的引物？...

如果是真核生物的话，随机引物或者oligodT都可以的，一般选用oligodT。原核生物只能用随机引物。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-23 14:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 14:30:03
如果是真核生物的话，随机引物或者oligodT都可以的，一般选用oligodT。原核生物只能用随机引物。...

啊？这是为什么？我做的真核的，如果要做18s rRNA的话，能用Oligo(dT)的引物么？
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-23 15:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

哦，如果做rRNA基因的话，要用随机引物。oligodT用于反转录mRNA。有些公司的反转录盒子把随机引物和oligodT混起来使用，就没有问题的。
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-24 03:45:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jwucn

至尊木虫 (文坛精英)
..........................帮您顶一个...................................
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-24 07:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyf608

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个其实跟算法有关吧。一般内参的表达水平都是基本肯定的，都是一些housekeeping gene。
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-24 09:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-24 03:45:09
哦，如果做rRNA基因的话，要用随机引物。oligodT用于反转录mRNA。有些公司的反转录盒子把随机引物和oligodT混起来使用，就没有问题的。

恩，我也是这么认为的~但是我用Takara的反转录试剂盒，用的是Oligo(dT)的引物，但是做了荧光定量，还是能够检测出比较高的表达，这是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-24 10:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gyf608 at 2013-04-24 09:49:40
这个其实跟算法有关吧。一般内参的表达水平都是基本肯定的，都是一些housekeeping gene。

跟什么算法有关？
赞一下 回复此楼
10楼2013-04-24 10:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wxl007777 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +10 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 10/500 2026-03-30 18:34 by 544594351
[考研] 297求调剂 +17 田洪有 2026-03-26 18/900 2026-03-30 18:32 by nothing投稿中
[考研] 332求调剂 +6 @MZB382400 2026-03-28 6/300 2026-03-30 16:57 by 无际的草原
[考研] 求化学调剂 +11 wulanna 2026-03-28 11/550 2026-03-30 10:59 by 探123
[考研] 318求调剂 +7 陈晨79 2026-03-30 7/350 2026-03-30 10:49 by 探123
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +14 jhybd 2026-03-23 19/950 2026-03-30 10:34 by vgtyfty
[考研] 0856求调剂 +8 楒桉 2026-03-28 8/400 2026-03-30 10:00 by wzy-lxz
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +10 大馋小子 2026-03-28 10/500 2026-03-29 23:35 by 飞行日记西
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +7 @taotao 2026-03-29 7/350 2026-03-29 12:03 by longlotian
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭