应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于qRT-PCR内参基因的验证
111/2返回列表12下一页
查看: 3710  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 关于qRT-PCR内参基因的验证

看了很多的文献，都是选择总量一定的Total RNA，反转录之后，检测不同处理下，不同内参基因的表达情况，从而选择合适的内参基因。

我的疑问是：假设我选择的内参基因在不同处理下表达量一致，但是肯定有其他基因表达量是不一致的，也就是说内参基因占所有基因表达量的比例不一样，那即使取等量的Total RNA进行比较，又有什么意思呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-22 23:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wxl007777: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-23 09:42:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-23 12:26:44
你要检测的是mRNA的水平，mRNA占总RNA里的百分比很低，总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变，对总RNA的影响很小。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-04-23 01:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 01:57:21
你要检测的是mRNA的水平，mRNA占总RNA里的百分比很低，总RNA主要是rRNA。即使有些基因的mRNA改变，对总RNA的影响很小。

那是否要求在反转录的时候，必须使用随机引物，而不能使用Oligo(dT)的引物？
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 09:43:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wxl007777 at 2013-04-23 09:43:27
那是否要求在反转录的时候，必须使用随机引物，而不能使用Oligo(dT)的引物？...

如果是真核生物的话，随机引物或者oligodT都可以的，一般选用oligodT。原核生物只能用随机引物。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-23 14:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 14:30:03
如果是真核生物的话，随机引物或者oligodT都可以的，一般选用oligodT。原核生物只能用随机引物。...

啊？这是为什么？我做的真核的，如果要做18s rRNA的话，能用Oligo(dT)的引物么？
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-23 15:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

哦，如果做rRNA基因的话，要用随机引物。oligodT用于反转录mRNA。有些公司的反转录盒子把随机引物和oligodT混起来使用，就没有问题的。
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-24 03:45:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jwucn

至尊木虫 (文坛精英)
..........................帮您顶一个...................................
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-24 07:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyf608

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个其实跟算法有关吧。一般内参的表达水平都是基本肯定的，都是一些housekeeping gene。
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-24 09:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-24 03:45:09
哦，如果做rRNA基因的话，要用随机引物。oligodT用于反转录mRNA。有些公司的反转录盒子把随机引物和oligodT混起来使用，就没有问题的。

恩，我也是这么认为的~但是我用Takara的反转录试剂盒，用的是Oligo(dT)的引物，但是做了荧光定量，还是能够检测出比较高的表达，这是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-24 10:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gyf608 at 2013-04-24 09:49:40
这个其实跟算法有关吧。一般内参的表达水平都是基本肯定的，都是一些housekeeping gene。

跟什么算法有关？
赞一下 回复此楼
10楼2013-04-24 10:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wxl007777 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 求调剂（材料与化工327） +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭