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再见七里香

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[求助] Ni-NTA柱纯化组氨酸标签蛋白求助

Ni-NTA柱中用到平衡缓冲液等缓冲液中总要含有一定浓度的NaCl，用于消除离子交换效应，请问在蛋白纯化过程中离子交换效应指的是那些呢？

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1楼 2013-04-11 20:24:52

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ycufb

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 很详细 2013-04-17 23:17:59
再见七里香: 金币+10, ★★★很有帮助, 感谢！ 2013-04-18 08:58:51

如果加氯化钠对你的蛋白没有影响，建议加，一般是50-500mM，一般选150mM，差不多生理盐水浓度。你可以做个对照看加氯化钠和不加氯化钠对你的蛋白纯度和收率有没有影响。原理其实和离子交换柱有点像，因为他的胶颗粒上可能会有离子键，然后通过离子键非特异吸附蛋白。另建议加10-20mM咪唑在你的除洗脱buffer的所有buffer里面，并在上柱之前用高浓度咪唑过一遍柱子，平衡之后再上柱，有利于减少非特异性吸附。

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2楼2013-04-17 23:07:08

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